构建腺病毒载体时目的基因要和gfp融合么,有点小纠结,融合的话会不会影响我的目的蛋白

来源：学生作业帮编辑：神马作文网作业帮分类：综合作业时间：2024/11/10 11:32:33

当然有可能会了,GFP不是在C端就是在N端,连接好后,先放在一般质粒载体上去表达,看看此蛋白还具不具备应有的功能,这是必须要做的步骤,验证功能的办法很多,比如免疫共沉淀,信号转导功能,膜定位或核定位等,只有确证无误,才能接着去病毒载体再invivo试验.
再问：我的腺病毒载体本身具有gfp，不知道我的目的基因要不要去掉终止密码子，与其融合。要么引物下游加his标签？
再答：我知道你的腺病毒载体有GFP标签，但是病毒包装一次很麻烦，而且滴度够不够用也是问题，交给公司做那就另说了。你的追问我不太明白，你现在还不知道GFP加在哪一端更合适？是吗？还是上面的回答，需要验证一下。如果你不纯化蛋白，加HIS没有什么道理。其实标签加在哪里是很关键的，有很多这样的文章，尤其是对小蛋白和受体蛋白来说，很可能GFP加进去就影响功能了，所以要排除这种可能的影响，再做下面的实验才有意义。
再问： GFP在多克隆位点的后面，我想加标签是为了后面便于鉴定我的目的基因连上后是否能成功表达。
再答：那就是在C端了，连上GFP当然是更方便看外源蛋白有没有表达，不过你不是先要排除连上GFP后的融合蛋白不影响原来蛋白的功能吗？
再问：哦哦验证麻烦不？
再答：你后面要做它的什么功能，就要验证它的什么功能，比如做个co-IP，如果是膜蛋白，那么你的融合蛋白还能不能膜定位等等。

构建腺病毒载体时目的基因要和gfp融合么,有点小纠结,融合的话会不会影响我的目的蛋白关于载体构建的问题我要构建一个GFP表达载体标记人体骨髓间充质干细胞的黏着斑,我想问一下这个载体的目的基因怎么获得?质粒大家好,我现在做细胞实验开始需要构建目的基因的过表达,不知道应该选用慢病毒载体还是腺病毒载体,标书做原核表达的时候将基因与载体蛋白构成融合蛋白后蛋白分子量会不会变化基因工程中的逆转录病毒做载体时,逆转录病毒是RNA病毒,如何与目的基因结合?构建表达载体? 将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因,再将该融合基因转入真核生物细胞内,表... 目的基因与绿色荧光蛋白融合表达,可以用绿色荧光蛋白的抗体检测目的基因的表达水平吗? 融合蛋白肽指纹图谱分析,该蛋白为带有his标签的多角体融合目的蛋白（his-多角体蛋白-目的蛋白）我有一段目的基因,需要构建表达载体,此时是扩增目的基因的全长还是? 我现在在构建表达载体,关于目的基因的获取,我想问问,目的基因是要从什么位置获取? 我已经有含有目的基因的T质粒了,怎样构建表达载体啊? 构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和