要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/10/07 01:21:35
要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
细胞按要求培养,抽RNA,反转录为cDNA.
有细胞计数,测RNA 浓度(分光光度计)等环节.
选择反应物,
待测样本:0hr,P4,L4,P12,L12,P24,L24,P36,L36 九种
阴性对照:即无模板对照,NTC
作为标准的样品:如果有必要做标准曲线的话,选择一种比较容易准确定量的DNA (如果是
进行绝对定量分析,则需要浓度完全已知的DNA 标准品——要求:能够被引物所扩增,比
如,其他种类细胞的cDNA,或,克隆有DNA 片段的质粒载体).
选择引物(基因)
endogenous control 使用的持家基因:GAPDH(甘油醛脱氢酶
转录水平待测的基因
因为每个反应管要做3 次重复以上,所以应该准备好充足量的 PCR 试剂,推荐——先混合
得到Master Mix,再分至各个反应管.
※标准曲线和待测样品其实应该在同一次real time PCR 中做.第一次做的话,试验的成分
更多些,所以,重复数应该大一些(4),这样就不得不把标准曲线和待测样品分开了.等到
有细胞计数,测RNA 浓度(分光光度计)等环节.
选择反应物,
待测样本:0hr,P4,L4,P12,L12,P24,L24,P36,L36 九种
阴性对照:即无模板对照,NTC
作为标准的样品:如果有必要做标准曲线的话,选择一种比较容易准确定量的DNA (如果是
进行绝对定量分析,则需要浓度完全已知的DNA 标准品——要求:能够被引物所扩增,比
如,其他种类细胞的cDNA,或,克隆有DNA 片段的质粒载体).
选择引物(基因)
endogenous control 使用的持家基因:GAPDH(甘油醛脱氢酶
转录水平待测的基因
因为每个反应管要做3 次重复以上,所以应该准备好充足量的 PCR 试剂,推荐——先混合
得到Master Mix,再分至各个反应管.
※标准曲线和待测样品其实应该在同一次real time PCR 中做.第一次做的话,试验的成分
更多些,所以,重复数应该大一些(4),这样就不得不把标准曲线和待测样品分开了.等到
要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
为什么要做real-time pcr 标准曲线
北京哪里能做real time PCR
用real time pcr 引物可以做一般pcr
请问real time PCR实验为什么要使用内参基因?
Real-time PCR和RT PCR有什么区别?
RT-PCR和Real time-PCR有什么区别
什么是real-time PCR
什么是real time PCR
下一步要做real time pcr,逆转录引物怎么选择,随机引物和oligo dT引物选哪个比较好
real-time PCR 标准曲线
什么情况下用real time PCR合适?什么情况下用半定量RT-PCR合适?