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AFLP选择性扩增 这是怎么回事啊!预扩增已经看到片段在1000bp以下有所富集,可是在预扩引物3‘端加上选择性碱基后,

来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/11/17 03:18:58
AFLP选择性扩增
这是怎么回事啊!
预扩增已经看到片段在1000bp以下有所富集,可是在预扩引物3‘端加上选择性碱基后,怎么显得扩增到1000bp以上去了!
还有,大家的ECOR1和MSE1的接头序列可不可以发上来大家核对一下啊.
我的是5=》3
Ecor1接头上链 CTCGTAGACTGCGTACC
Ecor1接头下链 AATTGGTACGCAGTCTAC
Mse1接头上链 GACGATGAGTCCTGAG
Mse1接头下链 TACTCAGGACTCAT
还有就是大家在合成接头时,是不是也是65度水浴10min,在室温下放置2个小时?然后4°冰箱保存下?
MARKER是2000的
AFLP选择性扩增 这是怎么回事啊!预扩增已经看到片段在1000bp以下有所富集,可是在预扩引物3‘端加上选择性碱基后,
我觉得你在预扩引物3‘端加上选择性碱基后,pcr应该更难拉出片段,不可能比第一次拉的还要长.我觉得这是跑胶的原因,你每次用的dna loading的不同,电泳缓冲液的不同都会导致结果会变一变,我建议你把第一次预扩增的产物和第二次预扩增的产物同时跑下胶,看是不是还是偏大.
我没有做过AFLP,只是根据我的经验推理的,因此你的第二个问题回答不了,建议你去看看分子克隆的标准protocol.