为什么我们基因克隆老失败

来源：学生作业帮编辑：神马作文网作业帮分类：综合作业时间：2024/09/24 13:20:15

为什么我们基因克隆老失败
我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开看不出来,所以我们先把PCR产物连在T载体上再切T载体,但是且过之后还是老连不上.有时候转化都长出菌落了但是菌落PCR却做不出来.我们用的T载体有pMD18-T pGM-T pEASY-T.请高人给一些克隆方面的指点吧,我们现在的进度一个月能做成一个克隆就不错了.

1 建议你直接切PCR产物,在酶切位点两端加2~3个保护碱基再切.这样避免两次纯化的麻烦.我都是这么做的.
2 你的T载体连接成功了么?就是有没有拿到重组T载体?
3 你用的是Taq还是高保真聚合酶?如果是Taq的话当心是在引物区或酶切位点造成点突变使得切不动.

为什么我们基因克隆老失败克隆的失败事例 PCR扩增抗除草剂基因为什么是克隆? 基因克隆操作中为什么要用到载体? 再问：做基因克隆为什么要提dna 基因克隆的步骤为什么在基因克隆中,除开设计PCR引物还要设计表达基因引物? 为什么基因测序前将基因PCR克隆后还要放到大肠杆菌载体上再测序? 现在基因克隆可以克隆什么东西? 基因克隆就是DNA克隆吗目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! 怎样克隆一个目的基因?