您好~PCR产物,AT含量很高,双向测序的效果都很差,大约过了100bp就是杂峰了,我该如何做?

来源：学生作业帮编辑：神马作文网作业帮分类：生物作业时间：2024/11/11 17:54:53

您好~PCR产物,AT含量很高,双向测序的效果都很差,大约过了100bp就是杂峰了,我该如何做?
我一般都是PCR产物直接送测,这回试过纯化后送测,效果没有改善.因为我这个片段比较长,3.2kb,需要转化挑克隆送测吗?效果能得到改善吗?

你的序列AT含量很高,测序结果不好,所以我怀疑是你的片段里有polyA或者是polyT,一般超过7个以上的都会引起后续的测序乱峰,你的乱峰前边如果是一连串的A或者T的话,那就是这个原因,想要测好得靠运气,即使是克隆也无法避免,你的片段这么长,仅用两个引物是肯定测不全的,必须还要再额外设计测序引物.如果没有poly结构则也可能是片段重复,这也会导致乱峰或移峰,现象和poly结构一样.如果这两种情况都没有,那就是你PCR做得不好,非特异太多且大小相近,需要改善条件或者重设引物.
再问：您好，现在测序返回的部分没有polyA或polyT，但是信号衰减严重。我重新P过许多次了，片段大小一致，而且我也进行过切胶回收后送测，结果也不理想。我在想，转化挑克隆送测的结果会不会有改善？我这段序列比较特别，中间的序列是已知的，两端的序列是未知的，分别设计引物得不到良好的扩增效果，才从两头扩增的。
再答：如果确定信号衰减严重，那有两种可能，最可能的是测序引物设计的很差导致测序PCR做得不好，另一个就是你产物确实不纯或者浓度偏低，建议你在送测时告知测序公司这个是高AT的片段，他们会优化测序条件。如果没有多聚结构则可以克隆测序，这个可以解决。但是如果你确定要克隆测序的话则必须使用保真酶做PCR，否则普通的Taq酶会因为保真性不好而引入很多突变，表现在实际中就是，你送去十个克隆测序，极有可能会得到十个不同的测序结果，这很郁闷的。

您好~PCR产物,AT含量很高,双向测序的效果都很差,大约过了100bp就是杂峰了,我该如何做? PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序数学不行,怎么补?我高一了,数学很差,但多数时候听得懂,就是做不了题,我很郁闷,我该怎么办啊? 如何做英语阅读题本人的英语基础差,所以每次做阅读题的都做的很差.就是这句.在这种情况下我该如何提高 PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我专八该如何准备明年三月就考专八了.可是我的英语基础很差,大学都没认真读,专四考了2次都没过.该怎么准备专八呢?像我这种情请问,我反转录时设置了2个循环,cdna还可以做半定量PCR吗?Actin的pcr在500bp单一条带. 我现在高一了数学很差我想去报补习班补高一的怎么样?效果怎样? 如何学英语?我的英语基础很差,现在上高三了,英语就考那么点,我真的不知道该怎么办了,完型和阅读就是不会做,我根本看不懂文我要做荧光定量RT-PCR,产物长度是73bp, 我现在已经高三了,但英语成绩很差,每次做阅读和完形单词很多都不认识,就一个个查,我感到很烦躁,现在只有两个月了,我该怎么该不该考六级?我英语基础很差,不过今年第一次考四级通过了.因为我之前做了10多套真题,分不是很高,452该不该考六级呢?