请教实时荧光定量PCR高手,我想做两个物种的鼠的同一基因的相对定量并比较,请问引物设计应该注意什么
来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/09/22 09:28:57
请教实时荧光定量PCR高手,我想做两个物种的鼠的同一基因的相对定量并比较,请问引物设计应该注意什么
因为这两个老鼠的目标基因CDS区序列不是完全相同,想要根据CDS区设计引物 需要注意什么?比如 1 可以在他们一样的序列处设计引物吗?扩增的序列长度要一样吗?2 内参基因可不可以用同一个引物 就是扩增同样长度的序列?还有这两引物要扩增跟内参一样的长度吗?新手 请不吝赐教
因为这两个老鼠的目标基因CDS区序列不是完全相同,想要根据CDS区设计引物 需要注意什么?比如 1 可以在他们一样的序列处设计引物吗?扩增的序列长度要一样吗?2 内参基因可不可以用同一个引物 就是扩增同样长度的序列?还有这两引物要扩增跟内参一样的长度吗?新手 请不吝赐教
建议你还是选择CDS区不一样的地方设计引物吧,这样可以避免交叉污染引起的非特异扩增,扩增的序列长度不一定要一样,每个引物你最好设计两三对,然后做一个相对定量看看不同引物的扩增效率,选择比较好的两对引物做后续试验,内参基因的引物不需要跟目的基因的扩增产物一样长,这样你设计引物的时候很受限制,总体产物长度在80-150bp之间都是可以接受的,主要是做相对定量的时候不同引物之间的扩则效率要比较接近,这样才有可比性.
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