引物加酶切位点以后还要分析吗?
来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/11/12 00:32:01
引物加酶切位点以后还要分析吗?
看样子你是要做克隆,给你说说我的经验吧,
带酶切位点的引物设计:保护碱基(4个)+酶切位点(6或8个)+与模板匹配序列(15-20个).如果是一般的质粒做模板15个配对的绝对没问题,如果是比较复杂的模板,文库一类的,20-25个.
保证3‘端的5个碱基里有3个是G/C就行.我从来不用软件分析的.
PCR时,退火温度就是60度,25个循环.
你试试吧,肯定没问题的,我以前设计引物时也是很小心的,用软件分析半天,其实发现没有多大影响的.发卡结构,3’封闭,GC含量,TM值,影响也都不是这么大.
纯属经验,希望你的实验有好结果吧
带酶切位点的引物设计:保护碱基(4个)+酶切位点(6或8个)+与模板匹配序列(15-20个).如果是一般的质粒做模板15个配对的绝对没问题,如果是比较复杂的模板,文库一类的,20-25个.
保证3‘端的5个碱基里有3个是G/C就行.我从来不用软件分析的.
PCR时,退火温度就是60度,25个循环.
你试试吧,肯定没问题的,我以前设计引物时也是很小心的,用软件分析半天,其实发现没有多大影响的.发卡结构,3’封闭,GC含量,TM值,影响也都不是这么大.
纯属经验,希望你的实验有好结果吧
有关PCR引物设计好像引物设计好以后,还要添加什么保护碱基,有时还要添加酶切位点,这些东西添加进去后,不是无法和模板链连
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