用的pfu酶,按照说明书的步骤跑的PCR 结果是这样的,请问是什么原因?

来源：学生作业帮编辑：神马作文网作业帮分类：综合作业时间：2024/09/28 21:25:33

左边的marker从上到下大小依次为2000、1000、750、500、250、100

首先一个问题是你的胶做得不好,这种情况其实很简单就可以解决,配方正确的基础上,只要融化的完全,冷却的完全,就可以避免,为什么大家都那么着急,很多人的marker都这个样子,不要急于一时.
再有个你的目的条带如果是250左右那就问题不大,这次结果拖尾严重最主要是胶的问题.
如果不是250左右,但是又出现这个大小的条带,那么还是考虑一下引物的问题吧.
不管核算还是蛋白电泳做一个好的胶才是出好结果的关键啊
再问：我的目的片段是 700多，这个是引物二聚体吗？我的引物是fp:gcattgcccagtccccaagga rp： tgcgggggagtacgtgggaagg
再答： Range 1: 1 to 21 GenBankGraphicsNext MatchPrevious MatchFirst MatchAlignment statistics for match #1ScoreExpectIdentitiesGapsStrandFrame42.1 bits(21)0.24()21/21(100%)0/21(0%)Plus/PlusFeatures:Query 1 GCATTGCCCAGTCCCCAAGGA 21 | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | Sbjct 1 GCATTGCCCAGTCCCCAAGGA 21 Range 2: 763 to 780 GenBankGraphicsNext MatchPrevious MatchFirst MatchAlignment statistics for match #2ScoreExpectIdentitiesGapsStrandFrame36.2 bits(18)15()18/18(100%)0/18(0%)Plus/MinusFeatures:Query 26 GGGGAGTACGTGGGAAGG 43 | | | | | | | | | | | | | | | | | | Sbjct 780 GGGGAGTACGTGGGAAGG 763 你做的是这个么，首先GC含量有点高，那就得相应提高退火温度，所以需要优化一下体系和pcr程序，还有那个250的条带肯定不是二聚体啊哪有那么大的二聚体啊可不可以适当地提高一点退火温度，延长点延伸时间，就像另一位说的，这个酶的效率可能没有taq高。但是要想从250，变到700多不太可能吧，感觉很有可能是模板的事。呵呵，我也是局外人，瞎猜而已。

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