神马作文网潮霉素B筛选CHO（中国仓鼠卵巢）细胞问题
来源：学生作业帮 编辑：神马作文网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/11/12 04:01:21
潮霉素B筛选CHO（中国仓鼠卵巢）细胞问题
从其它学校得来的CHO-Fln 细胞系,对其转染前,先要确定潮霉素B对其的筛选浓度,即两周内细胞全部死亡的潮霉素B浓度.（原实验室用的是50ug/ml有效）
做了6个梯度：10,50,100,200,400,600ug/ml,筛选两周后,还有10%CHO 细胞存活,细胞变圆,贴壁且成堆；加在浓度800,1000ug/ml,仍无效果；借用其它实验室无问题的潮霉素B重新筛选,两周后仍是10%CHO 细胞左右存活,细胞变圆,贴壁但分散不成堆.
潮霉素B应该没有问题,是否给我们的CHO细胞不纯,含有原实验室做过转染后的CHO细胞（转染后该细胞抗潮霉素B,但不抗Zecin）,若污染有抗潮霉素B的细胞的话,我之前用含Zecin的培养基培养过呀,应该死亡呀,
若本来就不能全部杀死的话,那我做转染后该怎么挑选单克隆呢?
从其它学校得来的CHO-Fln 细胞系,对其转染前,先要确定潮霉素B对其的筛选浓度,即两周内细胞全部死亡的潮霉素B浓度.（原实验室用的是50ug/ml有效）
做了6个梯度：10,50,100,200,400,600ug/ml,筛选两周后,还有10%CHO 细胞存活,细胞变圆,贴壁且成堆；加在浓度800,1000ug/ml,仍无效果；借用其它实验室无问题的潮霉素B重新筛选,两周后仍是10%CHO 细胞左右存活,细胞变圆,贴壁但分散不成堆.
潮霉素B应该没有问题,是否给我们的CHO细胞不纯,含有原实验室做过转染后的CHO细胞（转染后该细胞抗潮霉素B,但不抗Zecin）,若污染有抗潮霉素B的细胞的话,我之前用含Zecin的培养基培养过呀,应该死亡呀,
若本来就不能全部杀死的话,那我做转染后该怎么挑选单克隆呢?
降低细胞密度试试,在筛选前接种密度调成1000个/ml,贴壁后24小时加药,再做一次你的梯度实验.一般情况下,选择8-10天内全部死亡的浓度为好.
如果这样还能形成细胞克隆点的话,可以100%的说明你的细胞混有潮霉素B抗性细胞.为了免去后续实验的麻烦,最好购买或再找人要个新的细胞.
如果这样还能形成细胞克隆点的话,可以100%的说明你的细胞混有潮霉素B抗性细胞.为了免去后续实验的麻烦,最好购买或再找人要个新的细胞.