怎样提纯编码某种蛋白质的cDNA,并用实验证明所克隆的cDNA是正确的?
来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/10/01 07:46:02
怎样提纯编码某种蛋白质的cDNA,并用实验证明所克隆的cDNA是正确的?
原题是:How to purify a cDNA for a protein found (ProA) in human milk?Include an experiment to demonstrate you truly have cloned a correct cDNA.
原题是:How to purify a cDNA for a protein found (ProA) in human milk?Include an experiment to demonstrate you truly have cloned a correct cDNA.
不知你的目的是什么,估计你应该是检测某种细胞或组织中是否表达这种蛋白!首先你得知道此种蛋白质的核苷酸序列,从而设计引物,然后提取此细胞中的总mRNA,依此引物进行反转录特异性扩增你需要验证的蛋白质DNA序列,最后电泳检测,进行胶回收就可以纯化了!
若要实验证明所克隆的cDNA是正确的,只需对纯化的DNA进行测序就可以验证了!
再问: 看下原题,我也是不大懂题目的意思
再答: 看原题好像是要做一个实验确定人乳汁中是否含有ProA蛋白成分。ProA蛋白为一种已知的蛋白(为一种胞外蛋白酶),能在NCBI中下载其基因序列;而人的乳汁是在乳腺中分泌的,这样就可以设计引物从乳腺细胞中的mRNA中反转录出CDNA。另外要验证的话跑电泳根据扩增条带大小可粗略判定,要确认直接测序就行!
再问: 可不可以将主要步骤分别列出来
再答: 上面的回答基本上就是主要的步骤了啊!实际上自己对这道题的理解也不一定是正确的!看还有别的人能否给出不同的理解!
再问: 谢谢你了,我觉的题目就是要你合成能表达那种蛋白的cDNA吧,然后验证一下
若要实验证明所克隆的cDNA是正确的,只需对纯化的DNA进行测序就可以验证了!
再问: 看下原题,我也是不大懂题目的意思
再答: 看原题好像是要做一个实验确定人乳汁中是否含有ProA蛋白成分。ProA蛋白为一种已知的蛋白(为一种胞外蛋白酶),能在NCBI中下载其基因序列;而人的乳汁是在乳腺中分泌的,这样就可以设计引物从乳腺细胞中的mRNA中反转录出CDNA。另外要验证的话跑电泳根据扩增条带大小可粗略判定,要确认直接测序就行!
再问: 可不可以将主要步骤分别列出来
再答: 上面的回答基本上就是主要的步骤了啊!实际上自己对这道题的理解也不一定是正确的!看还有别的人能否给出不同的理解!
再问: 谢谢你了,我觉的题目就是要你合成能表达那种蛋白的cDNA吧,然后验证一下
怎样提纯编码某种蛋白质的cDNA,并用实验证明所克隆的cDNA是正确的?
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设计克隆一个基因的CDNA序列的实验!注意是实验哦!周四之前!谢谢,满意再+50!
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