PCR 片段直接测序和 PCR 片段经克隆后测序的结果有何区别 ?

因为GC之间有三个氢键,而AT之间只有两个氢键,因此GC含量越高,要打开氢键的能量就要求越大,即退火温度越高.PCR退火有的是根据GC含量估算Tm更详细说明次料：PCR引物应该保持合理的GC含量.含有

1、一百多BP也可以,不超过两百即可,150bp以内最好.2、坐标线?是标准曲线吧?你的方法是可以的.3、刚好100bp确实存在这个问题,一百几十BP就可以分开了.4、探针法在原理上更为严格,所得数据

第二次比如目的基因是300bps,母链DNA2000bpsforwardprimer从母链第25碱基开始由5'-3'开始复制,backwardprimer从第325由3'-5'开始反向复制.第一次复制

假阳性1.平板是否加抗性?2.引物设计是否有问题?3.载体自连现象是不是很严重?建议做个对照4.菌落pcr条件是否合适?

博凌科为-为你TakaraLATaq酶,体系同说明书.反应程序是：（要求引物Tm值在70度左右,但上下只能浮动2度.Primer5计算）No.ofCyclesTemperature(℃)Duratio

建立基因文库（用限制性内切酶将整个基因组切碎,连上载体,导入大肠杆菌进行克隆）,需要时进行查找,扩增.

博凌科为-为你你这样解决不了问题.像你现在使用的2stepPCR不是用来解决上下游引物退火温度不一致的,而是用来解决引物不完全配对的情况的,比如克隆基因使用的引物因为和存在游离的内切酶位点,所以不能完

这是由你设计的引物决定,一般控制在200bp以下为佳.包括你要检测的目的基因,设计的片段长度也控制在200bp以内.保证扩增效率较为一致.

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可以,只要你的PCR扩增特异性够强,没有杂带.这其实就是理论和实际的差距,因为表达载体的扩增效率低,如果一次实验不成功,你还要从PCR步骤做起重新收集DNA,而如果克隆至扩增载体,每次只需扩增质粒回收

原理：是来至于双脱氧链终止法——现在应用最多的核酸测序技术,由Sanger等1977年提出：模板经过测序PCR反应后形成3'末端带有荧光标记（早期用同位素标记）的相差一个碱基的不同长度的产物,再根据每

貌似没听说过,你的酶和dNTP买回来之后说明书上会给出你合适的体系,那个dNTP绝对都是足量的.

众所周知,PCR圹增过程中会出现很多错配现象,但不可能所有的错配都发生在同一位置.PCR片段直接测序时,其结果是PCR片段众多分子的混合物的结果.如果在某一个点上出现了几十次错配现象,但大多数分子（或

引物重新设计.还有一个方法,就是回收目的条带,然后用回收后的产物为模板,再次扩增.

.PCR每分钟能扩增多长的片段和PCR仪没有关系,只和你PCR体系中的酶和buffer有关.再问：那到底每分钟能够扩增多少bp的片段啊再答：你看看你用的是什么酶，找找那酶的说明书，上面肯定写了再问：酶

PCR的反应在进行时,的确会产生不需要的片段.实际应用的时候,我们都会在需要的基因片段上染色或者标记萤光.由于价格上的原因,目前国外的实验室都采用染色的方法.而且随着反应的进行,由于大量引物的存在,需

应为PCR扩增出来的是混合物,酶切回收后才基本是纯的目的片段.载体一般不用PCR扩增,一般是质粒来源,也需要用切口一致的酶消化回收.之后连起来就好了再问：那PCR扩增出来的混合物里除了目的片段还有什么

太大严重影响扩增效率,一般为70-200bp.

pfudnapolymerase是目前已知dna合成准确性最高的酶.在正常的pcr扩增程序下,其扩增产物的错误率为4000bp中发生一个.错误率仅为taqdnapolymerase的1∕7--1∕10

你两次实验的PCR模板是否同一个样本?如果是同一个样本,那就说明你的PCR试剂或者引物有问题,更换如果不是同一个样本,就再做一次实验把曾经扩增出目的片段的那个DNA或cDNA样本,现在扩增片段小于目的