如何判断DNA电泳条带效果好不好
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/09/20 02:15:06
核糖体RNA的含量最高,因此这三条带最明显,可是其实不只是这三条,可能你们实验条件有限,只看到3条了,我实验中有时候能看到很多条
有没有可能,有环状超螺旋DNA、开环DNA与变性的线型DNA三种空间构想,导致跑出3条带
会降解的吧不负责任建议:你把图片保存,然后全部回收,扔冰箱里明天再对应着看~~~~~或者你直接打电话给教授,网上用QQ之类的讨论也一样,反正都是电子图片
中间的是RNA
可以照胶的时候去调节亮度,对比和γ射线,然后会清楚一些.同时,你优化下PCR扩增条件之类的,提高扩增效率.希望对你有帮助.望采纳.再问:感谢回答,我会试试调节亮度。请问,这跟电泳时使用的染色液有关系吗
一般Marker中亮的条带是100ng,其他的条带是50ng.可以看到你回收之后的条带亮度估计在10ng~30ng左右,如果你的上样体积为10ul,则浓度应该是1ng~3ng/ul,这个浓度是很低的,
条带显示的亮度是你一定体积上样量的DNA总量,而你吸光度测定是浓度,两个比较不能说明什么,电泳只是体现有没有和相对其他条带DNA的大小和量
首先越靠近点样孔,分子量越大,如果你加了marker,可以根据厂家给的那张maker的图推测样品的大小,一般来说,在同一水平位置的分子量大致相同.没什么特别高深的技术含量分子量与亮度和长度无关的,亮度
可能有几个原因:一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是
先说质粒电泳图.最上面发亮的是加样孔,下面最亮的是未降解的RNA,中间那条亮度最低的是质粒.几点建议:1一定要加marker,否则很难判断大小,2胶浓度应该再小一点,3跑得时间太短,4加些DNAsef
非特异性扩增优化下pcr条件在不行的话就重新设计引物
主带显著的情况下,很可能是引物聚合体.如果没有出现显著的你想要的主带,则是非特异扩增产物.第一种情况没事不用理会,第二种情况需要筛查模版中与引物的非特异性互补区,重新设计引物,或者升高退火温度试试.
粗细代表DNA在胶中的扩散程度.电泳时间越长,胶密度越小、温度越高、电泳电压越高,DNA片段越短,条带就越粗,反之越细.
首先要看你的条带是否清晰,虽然亮度不够但是清晰度应该高,没有拖尾没有非特异条带和引物二聚体,如果以上都没有,仅仅是目标条带不够亮的话,我觉得你可以将25微升体积同比放大至50微升反应体系,相应的制胶的
出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2
marker能看到吗?marker很清楚,电泳就没问题.说明没有DNA.可能提取失败,沉淀也许是盐.测测浓度吧,应该很低.看看提取程序是不是有问题.
开始我以为是退火温度问题,但是你说做了两次,第一次没有条带,第二次有一条没有,这说明你加样有问题,还有你为什么要同一个cDNA要做六个PCR呢?还是lz说的不清楚?同样的条件同样的样品没理由会六条中只
如果引物序列,PCR体系,程序,以及所用的物种都和文献一样的话,可考虑两种情况:1.你所参考的文献真实度有待考量.2.你所提取的该物种DNA质量不好.需重新提纯.
对颜色较深的条带进行切胶,切胶之后加入TE溶液,4度过夜后进行PCR(用带GC夹子的),再进行DGGE电泳以确定是单一条带;确认之后再用不带GC夹子的引物进行PCR,之后克隆、测序、系统发育分析即可.
能的.因为DGGE是部分变性,所以切胶回收后经过复性即可.根据你的酶切位点连接到载体上就可以送去测序了.不过有点奇怪为什么你想测序呢?