只一种限制酶切质粒和载体连接结果

质粒是指细菌细胞质中的小型环状DNA分子,主要控制细菌的次级代谢载体是指在基因工程中用以协载目的基因的小型环状DNA分子,载体一般是经过改造的质粒,还可以是动植物病毒的DNA

切割的目的是将载体和目的基因进行连接用同一种限制酶切后产生的dna片段切口处相同能够连接再问：A.切割目的基因与切割运载体（如质粒）时必需用同种限制酶B.切割目的基因或运载体时一般只用一种限制酶这两个

其实用同一种限制酶（单酶切）分别切割目的基因与运载体是最简单的一种方法,因为切割后能产生相同的粘性末端,末端之间能发生碱基互补配对而形成重组DNA分子,操作简单,但连接后会出现两种不需要的连接方式：目

1.只有这样才能保证切得是同一位点2.一样

目的基因和载体要用同一种限制性核酸内切酶切割,不然就没法连了.用不同的限制酶切两端,防止载体自连或目的基因自连.再问：额。。。。。你怎样保证两端用不同的限制酶切。。。再答：呵呵，看来你是一个好问的学生

不管酶切还是PCR,都是间接的结果.要确定克隆的正确,一定要测序的啊.你测个序,问题就迎刃而解了.到底是什么问题也就清楚了.再问：我前些天去遇到一样的问题，酶切鉴定正确，但测序后什么也不是呢再答：所以

具有相同的粘性末端的两条DNA链在连接酶的作用下相连.只有一种酶切时,切出的粘性末端相同,让目的基因和质粒相连接即可,但是由于是混合,连接的结果不尽相同.DNA连接酶将目的基因和质粒粘性末端的3-5磷

最后是两种酶,但我们在工作实践中也常有用一种酶的时候,确实存在易环化的问题,不过后面不是还要挑克隆吗,还要鉴定,那时挑到正确的就可以了.

好处有两点：1可以有效的避免载体质粒自连,提高重组质粒的比例.2可以控制插入片段的的方向.因为单酶切的话插入的方向是随机的,而双酶切片段的插入方向是一定的.

如果是重组质粒的话,应该两种,正义基因表达载体和反义基因表达载体.再问：���������廹���������������ͷ��������������

不对,因为太绝对!一般情况下是用同一种限制性内切酶,这样暴露同样的黏性末端,然后用DNA连接酶进行连接.但是也存在不同的限制性内切酶切割形成相同的黏性末端.

没错,只有用同一种酶处理,载体和目的基因两端才会形成相同的粘性末端,才能把两者连起来.

要用同一种限制性内切酶对目的基因和质粒载体进行切割,再用DNA连接酶进行连接

细菌表达载体如PET系列,载体有自身的启动子和终止子,只要把你片段从ATG后面到TAA加进去就行了.如果不要C段tag,就带TAA,如果要C段tag,就去掉TAA

用同种限制酶说明质粒里面也有和目的基因一样的基因''这样说是不正确的.限制酶识别的是碱基对序列的顺序而不是“基因种类”.用同样的限制酶处理目的基因和质粒是为了产生相同的粘性末端,以便可以将两者连接起来

这样可以使切割后的目的基因与质粒连接上

我理解楼主的问题是这个样子.在连接之后的筛选其实是分两步的.第一步是筛选出含有载体标记基因的连接产物,这样的产物可能有载体-目的基因连接和载体-载体连接,利用的一般是载体上的标记基因的抗性培养（一般的

穿梭质粒是指可以在多种宿主下复制.比如说通常能够在哺乳动物,酵母或者其他细菌复制表达的质粒,同时可以在大肠杆菌内复制.这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备.表达质粒就是指带有启动子,增强子等等,使

不是…一种是需要的产物,一种是切开以后又合上了,等于没切.还有一种是载体载体连接的,就是两个载体连在一起的特殊产物再问：那这种在培养基上也能生长，如何筛选？再答：这种可以用与筛选未被切开的载体相同的方

一般在人工质粒上对于某种限制酶只设置一个位点,以防止因过度消化而导致质粒断开但是一个质粒上可以同时存在多种限制酶的位点