为什么PCR扩增后跑胶有很多条带
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/09/21 02:39:48
因为DNA聚合时需要3‘OH,这个只能由引物提供(没原因,就因为是那样).这个引物是一小段RNA,引物绝对是RNA,而不是DNA.看看DNA复制需要什么酶就知道了,需要依赖DNA的RNA聚合酶(DDR
一般情况下,循环30次产生的基因片段就够用了,在进行下去酶的活性可能也不会太好
冷却的时候才能使得引物和模板结合啊.这一步也叫退火.
看完楼上的回答,哥笑得无语了.一群饭桶在乱抽!PCR根本就不用ATP的,它是用dNTP(即三磷酸脱氧核苷酸)作原料的,与模板链结合时先生成焦磷酸,焦磷酸不稳定,容易转化为两个磷酸并释放能量(因为它其中
直接从生物组织中提取的DNA的量一般都是很少的,所以需要PCR进行扩增,使其达到一定的浓度,才方便进行下一步的操作.
生物上克隆包括分子水平、细胞水平、个体水平的克隆,PCR扩增基因属于分子水平上的克隆
ATCG.原理就是体外环境模仿人体内环境,完成人体内的DNA复制,大概就这样.
在PCR中常用的DNA聚合酶Taq只具有5‘->3’的聚合活性(当然还有外切酶活性,这里暂不考虑)
因为DNA聚合酶需要结合在双链区域,才能启动后续的脱氧核糖核苷酸的聚合作用.因此需要引物(PCR中是DNA,而生物体内是RNA)来构成双链区,从而使DNA聚合酶识别并结合,启动聚合作用.
实验有没有跑标准分子量DNAMarker?如果Marker电泳后条带正常,那么就是PCR无扩增条带;如果Marker也看不见,那就是配胶有问题,或者配胶用的试剂(比如染料)有问题
PCR不能扩增长点的DNA分子.要先截断后PCR,再连接.PCR出来的DNA是有误差的,尤其是后面几个循环.PCR常用来检验有没有某DNA.一些重组DNA分子比较大,比如说质粒.质粒在宿主细胞可以复制
这个你应该看仪器说明书啊,而且一般送货上门后有人会指导的啊.
能说下原题么、
你给的条件非常模糊,无法判断.因为PCR的反应条件与很多参数有关系.如模板浓度,引物长度及GC含量,引物浓度,dNTPs浓度,选用的taqenzyme,缓冲液的离子含量,产物大小,变性时间,退火温度及
PCR的反应在进行时,的确会产生不需要的片段.实际应用的时候,我们都会在需要的基因片段上染色或者标记萤光.由于价格上的原因,目前国外的实验室都采用染色的方法.而且随着反应的进行,由于大量引物的存在,需
连到载体后扩增有好处:载体相对于基因组或cDNA复杂度降低,扩增出的片段纯度比较高,而且循环数可以很低,如20-25循环切忌用载体扩增时用高循环,否则会有大量smear引物肯定需要加的!mg2+倒可以
底物(引物、dNTP)耗尽、酶活下降、产物多而抑制反应
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造
计算退火温度的方法:1.退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8)只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5(oroligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认
PCR扩增出目的片段,需要自己提取模板,可以是RNA,或者DNA.引物会结合模板,如果特异性不够好,比如引物与模板的其他位点结合,在PCR过程中就会产生很多不同条带.