神马作文网产淀粉酶菌种的紫外诱变及平板的初筛
来源：学生作业帮 编辑：神马作文网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/11/12 22:59:53
产淀粉酶菌种的紫外诱变及平板的初筛
我要实验全过程
我要实验全过程
紫外线诱变选育α-淀粉酶高产菌株
一、实验目的
1.学习菌种的物理因素诱变育种基本技术.
2.通过诱变技术筛选出高产ɑ-淀粉酶的菌株.
二、实验原理
紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素,其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型.紫外线诱变一般采用15W或30W紫外线灯,照射距离为20~30 cm,照射时间依菌种而异,一般为1~3 min,死亡率控制在50％~80％为宜.被照射处理的细胞,必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态,以利于均匀接触诱变剂,并可减少不纯种的出现.同时,对于细菌细胞的生理状态,要求培养至对数生长期为最好.
本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌,通过透明圈法初筛,选择淀粉酶活力高的生产菌株.
三、实验材料
⑴ 菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌
⑵ 器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器（含转子）、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL离心管、（1、5、10mL）吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球
⑶ 培养基和试剂
① 无菌水、75%酒精
② 0.5％碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL.先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘片全部溶解后,加足水即可.
③ 选择培养基 可溶性淀粉2g,牛肉膏1g,NaCl 0.5g,琼脂2g,蒸馏水100mL,pH6.7.0,121℃灭菌20min.
④ 肉汤培养基 牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,NaCl 0.5g,蒸馏水100mL,pH7.7.4,121℃灭菌20min.
四、实验步骤
⑴ 菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20 mL肉汤培养基的250mL三角瓶中,于37℃振荡培养12h,即为对数生长期的菌种.
⑵ 菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心管中,以3000r/min离心10min,弃去上清液.加入无菌水9mL,振荡洗涤,离心10min,弃去上清液.加入无菌水9mL,振荡均匀.
⑶ 诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中（内放一个磁力搅拌棒）,置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯下（距离30cm）照射0.1min.
⑷ 取0.0.2mL诱变后菌悬液于选择培养基平板上,用涂布器涂匀.置37 ℃暗箱培养48h.
⑸ 在长出菌落的周围滴加碘液,观察并测定透明圈直径（C）和菌落直径（H）,挑选C/H值最大者接入斜面保藏.
五、注意事项
1.紫外线对人体的细胞,尤其是人的眼睛和皮肤有伤害,长时间与紫外线接触会造成灼伤.故操作时要戴防护眼镜,操作尽量控制在防护罩内.
2.空气在紫外灯照射下,会产生臭氧,臭氧也有杀菌作用.臭氧过高,会引起人不舒服,同时也会影响菌体的成活率.臭氧在空气中的含量不能超过0.1％~1％.
一、实验目的
1.学习菌种的物理因素诱变育种基本技术.
2.通过诱变技术筛选出高产ɑ-淀粉酶的菌株.
二、实验原理
紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素,其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型.紫外线诱变一般采用15W或30W紫外线灯,照射距离为20~30 cm,照射时间依菌种而异,一般为1~3 min,死亡率控制在50％~80％为宜.被照射处理的细胞,必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态,以利于均匀接触诱变剂,并可减少不纯种的出现.同时,对于细菌细胞的生理状态,要求培养至对数生长期为最好.
本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌,通过透明圈法初筛,选择淀粉酶活力高的生产菌株.
三、实验材料
⑴ 菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌
⑵ 器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器（含转子）、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL离心管、（1、5、10mL）吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球
⑶ 培养基和试剂
① 无菌水、75%酒精
② 0.5％碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL.先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘片全部溶解后,加足水即可.
③ 选择培养基 可溶性淀粉2g,牛肉膏1g,NaCl 0.5g,琼脂2g,蒸馏水100mL,pH6.7.0,121℃灭菌20min.
④ 肉汤培养基 牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,NaCl 0.5g,蒸馏水100mL,pH7.7.4,121℃灭菌20min.
四、实验步骤
⑴ 菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20 mL肉汤培养基的250mL三角瓶中,于37℃振荡培养12h,即为对数生长期的菌种.
⑵ 菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心管中,以3000r/min离心10min,弃去上清液.加入无菌水9mL,振荡洗涤,离心10min,弃去上清液.加入无菌水9mL,振荡均匀.
⑶ 诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中（内放一个磁力搅拌棒）,置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯下（距离30cm）照射0.1min.
⑷ 取0.0.2mL诱变后菌悬液于选择培养基平板上,用涂布器涂匀.置37 ℃暗箱培养48h.
⑸ 在长出菌落的周围滴加碘液,观察并测定透明圈直径（C）和菌落直径（H）,挑选C/H值最大者接入斜面保藏.
五、注意事项
1.紫外线对人体的细胞,尤其是人的眼睛和皮肤有伤害,长时间与紫外线接触会造成灼伤.故操作时要戴防护眼镜,操作尽量控制在防护罩内.
2.空气在紫外灯照射下,会产生臭氧,臭氧也有杀菌作用.臭氧过高,会引起人不舒服,同时也会影响菌体的成活率.臭氧在空气中的含量不能超过0.1％~1％.
产淀粉酶菌种的紫外诱变及平板的初筛
高分悬赏啊请设计一个试验方案自土壤中筛选能产淀粉酶的枯草芽孢杆菌并进行诱变育种选育高产突变株.
请问怎样鉴别初始菌种与诱变菌种!能对RAPD技术进行详细的介绍吗?
平板划线分离法分离出来的是什么菌种?
用化学法如何进行菌种诱变?有哪位做过此项目?具体的操作过程?
土壤产淀粉酶的芽孢杆菌的分离实验
退浆用淀粉酶哪有生产的,求介绍
请问平板划线微生物中不能得到单一菌种的原因是什么?得到的单一菌种是不是就是纯种,
平板划线法,到底是怎么弄出独立菌种的啊?画几条线就行么?
工业产酶发酵中,对产酶菌种有什么要求?（普鲁兰酶产生菌的筛选）
分析利用传统诱变方法或者现代分子生物学手段对产酶微生物进行育种的利弊
采取平板划线法获得纯化的菌种时,经多次划线可以得到一个单细胞或单菌落,