透析袋怎么用

透析袋怎么用

透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一.在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术.
透析只需要使用专用的半透膜即可完成.通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止.保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”.
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的.透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度.
透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素（再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等）制成的透析膜,目前常用的是美国美国光谱医学公司（spectrum,上海欧韦达仪器科技有限公司是中华区特约总经销）和美国Union Carbide （联合碳化物公司,上海欧韦达仪器科技有限公司是华东区特约经销商）生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO）大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿（D）.
商品透析袋制成管状,其扁平宽度为8 mm～77 mm不等.为防干裂,出厂时都用10％的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去.
1.将透析管剪成适当长度（10-20cm）的小段,即成透析袋.
2.在大体积的2%（m/v)碳酸氢钠和1mmol/LEDTA(PH=8)中将透析袋煮沸10min.
3.将透析袋用蒸馏水彻底漂洗.
4.将透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min.
5.透析袋冷却后存放于4度,应确保透析袋始终浸没在液体中.
注：从此步起用透析袋时一定要戴手套操作.
6.在使用之前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗.
注：也可以将透析袋放在广口瓶中充满水,松动瓶盖,于20psi（1.40kg/cm2)高压灭菌10min,代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作.
使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中,若长时间不用,可加少量NaN2,以防长菌.洗净凉干的透析袋弯折时易裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用.
新透析袋如不作如上的特殊处理,则可用沸水煮五至十分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用.
美国美国光谱医学公司生产的透析袋大部分是预处理过的,即用型,使用前只需用蒸馏水冲洗即可使用,spectra/por7系列和生物技术级的透析袋基本不含硫化物和重金属离子.
使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也可以使用特制的透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破.含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时,体积增加50％是正常的.为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌.透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶.小量体积溶液的透析,可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下.
检查透析效果的方法是：用1％ BaCl2检查(NH4)2SO4,用1％ AgNO3 检查NaCl、KCl等.
为了提高透析效率,还可以使用各种透析装置.使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置.美国美国光谱医学公司生产的各种型号的透析设备,由于使用对流透析的原理,使透析速度和效率大大提高.
选用透析袋需要知道目的物质的分子量,每次处理的样品量,同一批次的平行试验,是否需要保持目的物质的活性来选择,目前国内使用的透析袋主要由上海欧韦达仪器科技有限公司提供,该公司能提供专业的技术指导.