我在设计引物的时候出现了疑问

来源：学生作业帮编辑：神马作文网作业帮分类：综合作业时间：2024/09/21 20:38:22

我在设计引物的时候出现了疑问
新手菜鸟求助,师姐曾留下一个设计好的质粒,酶切位点少.然后我打算将她的目的基因换成我自己的.但我的目的基因上酶切位点很多,启动子和终止子之间仅有的两个酶切位点目的基因上均有.我想可不可以将启动子抠下来,末端引物设计再多加一个酶切位点,即末端引物共两个酶切位点,然后再按上.不知各位高人是否其他的高见?一段设计两个酶切位点可行度是否较低?

具体有些什么酶切位点,能说来听听嘛?空对空很难讨论出什么结果.
再问：您说启动子和终止子之间的酶切位点吗？HindIII-启动子-BamHI-师姐的目的基因-SacI-终止子，我的目的基因上有BamHI 。所以我想将启动子下游加上一个酶切位点，这样下游就有两个酶切位点:HindIII-启动子-SacI-多插入的酶切位点-终止子，然后用SacI和插入的酶双酶切加入我的基因就行了。您看这样可行性大吗？
再答：　　你的意思是用启动子为模板做PCR，利用PCR把一个酶切位点引入启动子下游，对吧？这么做当然可以，不过完成后你可能要对启动子测序，因为PCR可能会造成启动子有突变。所以这不是最好的策略。　　你的目的基因也要经过PCR，然后再连接到这个载体中吗？还是直接从其它载体切下来接进去？你的目的基因上有BglII吗？
再问：我本想将启动子弄到一个质粒上，再切下来但是序列总是不如意所以我想只有这种方法了但是一段引物加两个位点总觉得不太可行作为一个新手菜鸟来说。目的基因也要经过PCR的 Bgl II酶切位点目的基因上是有的。。。。
再答：目的基因上游有什么能用的酶切位点？你做过平端连接吗？

PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我 PCR中Tm值的疑问我有一段引物，比如NNNNNN，然后我在这段引物前面加了标记，所以是XXXXXNNNNN，那么它的T 我最近想设计茎环结构的引物克隆MicroRNA,但不知我发给引物公司的单链引物,在我试验时是自动形成茎环结构,还是要在引如何在知道基因片段的情况下,设计引物? pcr引物浓度如果PCR反应体系的中,引物加多了,会有什么样的结果呢?那如果我加多了，是不是就是很可能总是出现引物二聚体引物的设计原则引物设计原则和具体步骤!原理! PCR的引物怎样设计, rt pcr的引物设计带酶切位点的引物设计问题我在安装SQL的时候出现用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度您好!我想问一下：在做原核表达的时候,设计引物是不是还要加标签和启动子.还是载体本事就带有标签