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纯化的双链cDNA要比单链的cDNA更容易做RT-PCR吧?

来源：学生作业帮 编辑：神马作文网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/11/14 19:39:34
纯化的双链cDNA要比单链的cDNA更容易做RT-PCR吧?
如题,
因为要P一段大约5-6kb的cdna片段,我在想合成cDNA的第二条链,然后纯化,这样应该更好P一些吧?
求问大虾?
纯化的双链cDNA要比单链的cDNA更容易做RT-PCR吧?
我觉得应该没啥区别吧 毕竟95度之后双链的就变成单链的了 而第一个循环之后 单链的也变成双链了 P这种长片段的话关键还是得用高保真的酶 否则很容易有突变 也可以分段P再连起来
再问： 可是毕竟纯化之后的双链cDNA要比逆转录之后的单链cDNA要更干净一些，没有其他蛋白质等的干扰，对于PCR来说不是更有利吗？另外分段P再连起来，您的意思是在中间找1个酶切位点，然后P的两端PCR产物酶切纯化以后再连起来？
再答： 你RNA提的纯度高 cDNA自然干净啊 也许纯化是有好处吧 只是我从来没这样做过而已 不用找酶切位点 比如分两段P的话 引物有F1 R1 F2 R2 其中F1 R2是你正常的想P整个这段的引物， R1和F2有一段的overlap可以搭起来 分别P出两段后跑胶回收 然后1:1的加在一起做模板再用F1 R2来P一次
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