神马作文网可以提取线粒体dna吗,
来源：学生作业帮 编辑：神马作文网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/11/19 06:03:33
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（1）Triton法： 取10的7次方细胞沉淀,悬浮于5ml的Triton溶解液中.温和振荡片刻后,室温下放置10min.反应完毕的溶液以8000r/min离心1min,上清即为mtDNA.
（2）碱变性法： 取107细胞沉淀,依次加入溶液A(4℃)150Λl,冰浴中将沉淀吹打分散后加入300Λl溶液B(常温),将Eppendrof管缓慢颠倒10次,冰浴裂解变性6～8min,再加入225Λl溶液C(0～4℃),轻柔混匀,冰浴复性20～25min.反应完毕的溶液以10000rmin离心6min,4℃,取上清.1.3.3改进高盐沉淀法[3] 取107细胞沉淀,加入溶液5500Λl,混匀,2000r/min,10min,弃上清.沉淀加溶液5500Λl,混匀,3500r/min,10min,弃上清.沉淀加溶液950Λl,混匀后加入20mg/ml蛋白酶K50Λl和10%SDS120Λl,快速混匀.40℃过夜或50℃4h.加入300Λl饱和醋酸钠,混匀,轻摇15S.15000r/min,4℃,15min,取上清Eppendrof管中.取上清后步骤相同.上清中加入等体积酚∶氯仿∶异醇(25∶24∶1),温和振荡8min,10000r/min,10min4℃,取上层水相重复该过程抽提一次,轻取上层水相.加入2倍体积冰乙醇或等体积异丙醇,冰浴30min,15000r/min,10min,弃上清.用70%冰乙醇漂洗沉淀,15000rmin,2min,彻底去上清.沉淀于空气中自然部分干燥25min,加入适量RTE液溶解.贮于4℃
（2）碱变性法： 取107细胞沉淀,依次加入溶液A(4℃)150Λl,冰浴中将沉淀吹打分散后加入300Λl溶液B(常温),将Eppendrof管缓慢颠倒10次,冰浴裂解变性6～8min,再加入225Λl溶液C(0～4℃),轻柔混匀,冰浴复性20～25min.反应完毕的溶液以10000rmin离心6min,4℃,取上清.1.3.3改进高盐沉淀法[3] 取107细胞沉淀,加入溶液5500Λl,混匀,2000r/min,10min,弃上清.沉淀加溶液5500Λl,混匀,3500r/min,10min,弃上清.沉淀加溶液950Λl,混匀后加入20mg/ml蛋白酶K50Λl和10%SDS120Λl,快速混匀.40℃过夜或50℃4h.加入300Λl饱和醋酸钠,混匀,轻摇15S.15000r/min,4℃,15min,取上清Eppendrof管中.取上清后步骤相同.上清中加入等体积酚∶氯仿∶异醇(25∶24∶1),温和振荡8min,10000r/min,10min4℃,取上层水相重复该过程抽提一次,轻取上层水相.加入2倍体积冰乙醇或等体积异丙醇,冰浴30min,15000r/min,10min,弃上清.用70%冰乙醇漂洗沉淀,15000rmin,2min,彻底去上清.沉淀于空气中自然部分干燥25min,加入适量RTE液溶解.贮于4℃