PCR产物克隆用pMD19连不上,可以用pGEM-T Easy吗

来源：学生作业帮编辑：神马作文网作业帮分类：语文作业时间：2024/11/17 22:53:39

做TA克隆吗?确定你PCR的时候用的扩增酶会在末尾加A,一般高保真酶都不会加A,也就不能用T载体连接了.另外还要考虑PCR片段太大会影响连接效率,还有片断和载体的摩尔比也有影响.
pMD19-T和pGEM-T Easy没有原理上的差别,当然考虑到可能是载体放久了出问题或者2X的ligation buffer出问题之类,还是值得换一下试试看的.另外invitrogen有一种做TA克隆的载体是利用拓扑异构酶的,如果你的PCR产物真的比较难做TA克隆也可以试一下.

pGEM easy-T载体上用的M13引物序列是什么? 用PCR合成DNA属于克隆吗细菌基因组DNA可以用纯化PCR产物的试剂盒提纯吗 GC buffer扩增出来的PCR产物可以用DHPLC进行突变检测吗 PCR产物可以直接测序吗提取的质粒跑电泳出来带很杂,目的片段1700bp,用的是pMD19—T载体,从左往右第三泳道和第九泳道是空质粒要克隆一段基因,什么情况用PCR,什么情况用重组质粒分子克隆法? 是否目的基因在PCR扩增时不用在引物中加入酶切位点,就可与pGEM-T载体连接?为什么? 模版DNA浓度低怎么办假如用PCR产物再做一次PCR 那PCR缓冲液那些是一样的嘛 pcr产物不纯化直接酶切连接可以吗?PCR反应的buffer会不会对酶产生影响哦~ 用real time pcr 引物可以做一般pcr 如何确保pcr产物以正确的方向克隆到表达载体中 (未翻译方向)