一般引物长度为18~30碱基,这里的长度指的是上下游序列(P+和P-)的总长度吗,P+和P-的Tm不同,退火温度怎
来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:物理作业 时间:2024/10/09 13:22:44
一般引物长度为18~30碱基,这里的长度指的是上下游序列(P+和P-)的总长度吗,P+和P-的Tm不同,退火温度怎
一般引物长度为18~30碱基,这里的长度指的是上、下游序列(P+和P-)的总长度吗,P+和P-的Tm值不同,退火温度该怎么计算?根据以下图片显示引物长度和Tm值分别是多少?
一般引物长度为18~30碱基,这里的长度指的是上、下游序列(P+和P-)的总长度吗,P+和P-的Tm值不同,退火温度该怎么计算?根据以下图片显示引物长度和Tm值分别是多少?
不是总长度,而是1条引物的长度,退火温度按照一对引物中较低的那条引物的Tm计算,即较低Tm值-5℃.图中的引物长度和Tm都写明白了啊.
再问: 非常感谢你的回答。另外,若P+和P-的长度不一样,就像上图,那延伸时间应该怎么算,是按长的那条吗,据我所知一般是1kb/min,那这里是需要21min吗。还有退火温度若按你说的,应该是52.8℃,那上面的56.8℃又代表什么呢?
再答: 延伸时间跟引物长度没有关系,而是要看你需要扩增的DNA长度,你要扩增的好像是1788个碱基,不到2kb,因此延伸时间约需2分钟。退火温度53-55度左右试试,太高扩增不出来,太低的话,会产生非特异性扩增。
再问: 非常感谢你的回答。另外,若P+和P-的长度不一样,就像上图,那延伸时间应该怎么算,是按长的那条吗,据我所知一般是1kb/min,那这里是需要21min吗。还有退火温度若按你说的,应该是52.8℃,那上面的56.8℃又代表什么呢?
再答: 延伸时间跟引物长度没有关系,而是要看你需要扩增的DNA长度,你要扩增的好像是1788个碱基,不到2kb,因此延伸时间约需2分钟。退火温度53-55度左右试试,太高扩增不出来,太低的话,会产生非特异性扩增。
设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度!
TAILPCR 反应体系中退火温度一般是多少 和特异引物的TM值有什么关系吗
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数轴上点P对应的数为-2那么与点p的距离等于4个单位长度的点所对应的数是几和几?
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