酸性蛋白酶产生菌的筛选方法?

酸性蛋白酶产生菌的筛选方法?
这是我们发酵工业老师出的实验题目,要我们自己找方法.查了网站发现,都是些过期的.紧急!

酸性蛋白酶是一种能在酸性环境下水解蛋白质的酶类,其最适作用pH值为2.5-5.0.由于酸性蛋白酶具有较好的耐酸性,因此被广泛地应用于食品、医药、轻工、皮革工艺以及饲料加工工业中. 目前用于工业化生产的酸性蛋白酶大多为霉菌酸性蛋白酶,此类酶的最适作用pH值为3.0左右,当pH值升高时,酸性蛋白酶的酶活会明显降低,且此类酶不耐热,当温度达到50℃以上时很不稳定,从而限制了酸性蛋白酶的应用范围. 因此,本研究以开发耐温偏酸性蛋白酶为目标,进行了以下几方面的研究： (1)偏酸性蛋白酶产生菌的分离筛选. (2)偏酸性蛋白酶粗酶酶学性质的研究. (3)偏酸性蛋白酶固体发酵条件的优化. (4)偏酸性蛋白酶产生菌P-1007的初步鉴定. (5)偏酸性蛋白酶在啤酒澄清中的应用. 本论文主要研究结果和结论如下： (1)用常规土壤分离方法,从土壤样品中筛选到一株产偏酸性蛋白酶的菌株,命名为P-1007. (2)通过单因素发酵条件实验和正交实验的方法得到最佳固体发酵条件为：麦麸15g,黄豆粉8％,葡萄糖3％,NaH2PO41％,CuSO40.2％,水35ml,最佳起始pH7.0,最适发酵温度为40℃.在此条件下所产酶活可达3700u/g,比原始菌株发酵酶活提高了将近2倍,且产酶稳定性较好. (3)菌株P-1007所产的偏酸性蛋白酶的最适作用pH值为5.5,最适作用温度为50℃.酶的pH稳定性和耐温性较好,50℃、pH5.5条件下保温8h后剩余酶活可达83％以上,pH5.5、50℃条件下保温2h后剩余酶活仍在70％以上.Mn2+、Cu2+对偏酸性蛋白酶有明显的激活作用,其它金属离子则对该酶有不同程度的抑制作用.与目前所得到的酸性蛋白酶相比较,偏酸性蛋白酶具有较高的作用pH值和较好的耐温性. (3)从菌株P-1007菌落形态、显微观察以及5.8SrDNA-ITS区序列分析可以看出菌株P-1007可能属于烟曲霉. (4)从酶学性质上可以看出,菌株P-1007所产的偏酸性蛋白酶的作用条件满足于啤酒澄清工艺的要求,因此本实验进行了偏酸性蛋白酶在啤酒澄清中的应用研究以及该酶与酿造复合酶和啤酒用中性蛋白酶作用效果的比较.研究结果表明：经偏酸性蛋白酶作用后,麦汁和发酵液中酪氨酸含量、透光率、总氮量、可凝固性氮含量都有了明显的提高.麦汁中a-氨基氮含量也增加了,说明偏酸性蛋白酶将凝固性蛋白质水解成了分子量较小的a-氨基氮,为啤酒酵母的生长繁殖提供了氮源.同时发酵液中的a-氨基氮含量却降低了,分析原因为发酵阶段中酵母利用a-氨基氮的速度比偏酸性蛋白酶降解蛋白质的速度快.麦汁和发酵液的pH值都无太大变化,因此不会影响啤酒酵母的生长和繁殖.在与酿造复合酶和啤酒用中性蛋白酶作用效果的比较中发现,三种酶的作用效果大致相同,但从最适作用条件来看,偏酸性蛋白酶比另两种蛋白酶更适合于啤酒澄清工艺. 以上研究结果表明,本课题筛选到的菌株P-1007所产偏酸性蛋白酶的作用条件特别适合于啤酒澄清工艺,因此在啤酒工业中有较好的应用前景. 关键字:烟曲霉,偏酸性蛋白酶,发酵条件优化,酶学性质,rDNA-ITS区序列分析,啤酒澄清