PCR后DNA跑电泳条带不明显的原因
来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/20 10:33:07
PCR后DNA跑电泳条带不明显的原因
问的很模糊呀!下次应该吧具体情况描述清楚,不然很难回答你呀!
条带不明显的意思是由你要的目标条带,但是,条带不亮对吧!那么可以试一下下列办法
1 在反应体系中加入稍为多一些的Mg离子
2 降低反应的温度
3 调整模板量,模板量太多或者太少均得不到很亮的条带.
4 增加循环数!
再问: 谢谢啊,可是为什么要降低反应温度呢。我做的是一个梯度温度,应该跟温度没关系。重新跑了一下竟然什么条带都没有了,这是为什么呢? 我是一学生,加的东西都是老师给的。
再答: 恩! 上面的那四点都是大致的情况,降低温度,增加Mg浓度实际上就是减少PCR产物特异性的!这样可以增加条带亮度! 但是你以前可以扩出条带,现在扩不出来,那么分析可能一下几个原因, 1 你加反应体系的时候出问题了!把反应体系列在旁边的纸上,加一个,打一个勾! 2 当然,上面只是非常特殊的情况,还有一种可能是模板降解了!如果不放心,最好是能换一下! 3 以上两个可能是最应该排除的,之后,可以采用20ul体系中加入1.4-1.5ulMgCl2的方法,扩增35个循环,在看看。同时考察目的片段的GC含量,看看是否需要换成GC buffer 4如果还出不来,那么还可以在调节一下PCR反应条件,适当增加退火时间! 祝好运
条带不明显的意思是由你要的目标条带,但是,条带不亮对吧!那么可以试一下下列办法
1 在反应体系中加入稍为多一些的Mg离子
2 降低反应的温度
3 调整模板量,模板量太多或者太少均得不到很亮的条带.
4 增加循环数!
再问: 谢谢啊,可是为什么要降低反应温度呢。我做的是一个梯度温度,应该跟温度没关系。重新跑了一下竟然什么条带都没有了,这是为什么呢? 我是一学生,加的东西都是老师给的。
再答: 恩! 上面的那四点都是大致的情况,降低温度,增加Mg浓度实际上就是减少PCR产物特异性的!这样可以增加条带亮度! 但是你以前可以扩出条带,现在扩不出来,那么分析可能一下几个原因, 1 你加反应体系的时候出问题了!把反应体系列在旁边的纸上,加一个,打一个勾! 2 当然,上面只是非常特殊的情况,还有一种可能是模板降解了!如果不放心,最好是能换一下! 3 以上两个可能是最应该排除的,之后,可以采用20ul体系中加入1.4-1.5ulMgCl2的方法,扩增35个循环,在看看。同时考察目的片段的GC含量,看看是否需要换成GC buffer 4如果还出不来,那么还可以在调节一下PCR反应条件,适当增加退火时间! 祝好运
PCR中,PCV2的引物扩增后,跑电泳的条带在多少bp?
用takara的酵母菌DNA提取试剂盒提取rDNA,PCR后跑电泳总没结果,出现火星带,没有条带,怎么回事?
PCR跑电泳每次都有条带但都不亮怎么找原因?
因为DNA溶度太低,PCR时我同一种DNA同时P了3管,跑电泳,条带位置却不一致.
提取细菌DNA检测到有条带,PCR后无条带;而基因组DNA检测到无条带的,PCR后却有条带.怎么解释?
提取根腐线虫DNA后,做PCR,用电泳检测却没有条带,可能原因有哪些?
做完PCR后为什么要跑电泳
PCR扩增不出来条带的原因?
RAPD反应,DNA检测有条带,PCR没有条带,请问谁知道原因啊?
用takara的试剂盒提取大米和大豆的基因组,pcr之后跑电泳,但是电泳总是没结果,没条带.
提取DNA跑电泳完后DNA条带好不好怎么看呀?
用总RNA跑电泳,rRNA是什么样子的条带?三条带是如何排列的?