假设我有一个引物,上游引物Tm为65.2℃,下游为64.6℃.请问怎样设计退火温度梯度,

上下游引物退火温度分别为47、49℃,如何设置温度梯度PCR最合适 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀? miRNA的qPCR的引物Tm值有什么要求吗?60℃左右行吗,还是上游引物需要高点啊? 反转录PCR引物如何设计?已经得到cDNA第一链,引物设计是以cdna为模版,设计上下游引物吗? 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度! PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kca 请问PCR一定要两条引物吗?如果我只加一条上游引物,是否可以扩出更长的片断?因为没有下游引物的中止作用了. 我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢 退火温度与引物的TM值有什么联系?为什么退火温度要比TM低5度左右最合适? 我的引物该如何选择?我要设计兼并引物,但是两个最佳位置处的引物Tm值相差较大,而且有二聚体和发卡结构,其余的位置兼并位点 TAILPCR 反应体系中退火温度一般是多少 和特异引物的TM值有什么关系吗 PCR扩增一下序列,请写出上游引物和下游引物.