神马作文网反转cDNA需要PCR热启动吗
来源：学生作业帮 编辑：神马作文网作业帮 分类：英语作业 时间：2024/11/12 19:48:55
反转cDNA需要PCR热启动吗
做反转录的时候,反应温度主要是和所用的反转录酶有关,有些是40C,有些可以达到50C甚至是65C.当然也和所用的引物有关：
– if an oligo(dT)18 primer or gene-specific primer is used,incubate for 30 min at 50°C.
– if a random hexamer primer is used,incubate for 10 min at 25°C followed by 30 min
at 50°C.
– for transcription of GC-rich RNA,the reaction temperature can be increased to 65°C.
Terminate the reaction by heating at 85°C for 5 minutes.
如果担心有非特异,可以等到PCR仪的温度升到反应温度再把管子放到机器里.
热启动说的主要是酶在正常温度下是没有活性的,需要通过95C反应一段时间,激活酶.一般PCR里面热启动比较常见,逆转录酶不太常见,你可以看说明书再确认一下.
– if an oligo(dT)18 primer or gene-specific primer is used,incubate for 30 min at 50°C.
– if a random hexamer primer is used,incubate for 10 min at 25°C followed by 30 min
at 50°C.
– for transcription of GC-rich RNA,the reaction temperature can be increased to 65°C.
Terminate the reaction by heating at 85°C for 5 minutes.
如果担心有非特异,可以等到PCR仪的温度升到反应温度再把管子放到机器里.
热启动说的主要是酶在正常温度下是没有活性的,需要通过95C反应一段时间,激活酶.一般PCR里面热启动比较常见,逆转录酶不太常见,你可以看说明书再确认一下.
反转录PCR引物如何设计?已经得到cDNA第一链,引物设计是以cdna为模版,设计上下游引物吗?
请问,我反转录时设置了2个循环,cdna还可以做半定量PCR吗?Actin的pcr在500bp单一条带.
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