持家基因和目的基因退火温度相差很大,怎么跑定量PCR啊?

PCR怎么获得目的基因 做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因? 做荧光定量PCR和半定量PCR有什么区别?半定量的PCR退火温度和荧光定量PCR是一样的吗? 请问荧光定量PCR进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致,为什么会导致结果的不准确? 怎么筛选目的基因,做PCR验证? 请教 做染料法荧光定量PCR,熔解曲线分析,如何区分目的基因产物和引物二聚体呢? pcr退火温度怎么确定? 第一次做荧光定量PCR,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是目的基因完全跑不出来 半定量rt pcr内参和目的基因的引物加的量相同吗,能否放在同一管中跑PCR PCR技术检测目的基因 荧光定量pcr扩得出目的基因但是检测不到内参gapdh 内参基因与目的基因的Ct值相差很大是什么原因