连接前加错了酶切的载体怎么办?

双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶 为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切的图示 用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗 我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带! 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急 用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物? 目的基因与载体的体外连接.为什么目的基因要比载体多些? 目的基因片段与载体DNA连接的主要有? 双基因 载体 连接需要将两个不同的基因同时连接到一个载体上,一般而言,是先将其中一个基因和载体相连,再将另一个载体和其相 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! DNA连接酶把目的基因与载体的黏性末端的碱基对连接起来, 目的基因片段与载体DNA连接的主要形式呢?