博凌科为新型快速植物DNA大量提取试剂盒（离心柱型）有哪些具体使用说明和注意事项

来源：学生作业帮编辑：神马作文网作业帮分类：综合作业时间：2024/10/03 04:38:42

博凌科为新型快速植物DNA大量提取试剂盒（离心柱型）改进的经典CTAB植物DNA抽提液内（添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱.
注意事项:
◆ 所有的离心步骤均在室温完成,使用离心力可以达到10,000×g的高速离心机.
◆ 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用.
◆ 需要自备β-巯基乙醇.
◆ Buffer P3 和HB buffer中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服.若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗.
◆ 不同来源的植物组织材料中提取的DNA 的量会有差异,一般1g新鲜组织典型产量可达30-250μg.
◆ 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应.也可以使用水洗脱,但应该确保PH大于7.5,PH过低影响洗脱效率.用水洗脱DNA应该保存在-20℃.DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl,1mM EDTA,PH 8.0）,但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释.
试剂盒特点:
◆ 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好.克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端.
◆ 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤.
◆ 快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成.
◆ 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.1.9,长度可达30Kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应.