0.015M乙酸锌溶液配制

0.015M乙酸锌溶液配制

因为费林试液要在沸腾状态,才跟还原糖反应生成氧化亚铜,还原糖被氧化.反应条件问题.
还原糖的测定方法：直接滴定法
.1:原理
样品经除去蛋白质后,在加热条件下,直接滴定已标定过的费林氏液,费林氏液被还原析出氧化亚铜后,过量的还原糖立即将次甲基蓝还原,使蓝色褪色.根据样品消耗体积,计算还原糖量.
2.适用范围
GB5009.7-85,本方法适用于所有食品中还原糖的检测.检出限0.1mg.
3.主要仪器
滴定管
4.试剂
除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯.
（1） 费林甲液：称取15 g硫酸铜（CuSO4?5H2O）,及0.05 g次甲基蓝,溶于水中并稀释至1 L.
（2） 费林乙液：称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氧化钠,溶于水中,再加入4 g亚铁氰化钾,完全溶解后,用水稀释至500ml,贮存于橡胶塞玻璃瓶内.
（3） 乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌,加3 ml冰乙酸,加水溶解并稀释至100 ml.
（4）亚铁氰化钾溶液.称取10.6g亚铁氰化钾,用水溶解并稀释至100ml.
（5） 盐酸.
（6） 葡萄糖标准溶液：精密称取1.000 g经过80 ℃干燥至恒量的葡萄糖（纯度在99%以上）,加水溶解后加入5ml盐酸,并以水稀释至1 L.此溶液相当于1 mg/ml葡萄糖.（注：加盐酸的目的是防腐,标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制）
5.操作方法
5.1样品处理：
5.1.1乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品）,置于100 ml容量瓶中,加50ml水,摇匀.边摇边慢慢加入5 ml乙酸锌溶液及5 ml亚铁氢化钾溶液,加水至刻度,混匀.静置30min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,滤液备用.（注意：乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等,使它们形成沉淀,经过滤除去.如果钙离子过多时,易与葡萄糖、果糖生成络合物,使滴定速度缓慢；从而结果偏低,可向样品中加入草酸粉,与钙结合,形成沉淀并过滤.）
5.1.2酒精性饮料：吸取50 ml样品,置于蒸发皿中,用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,在水浴上蒸发至原体积1/4后,移入100ml容量瓶中.加25 ml水,混匀.以下按4.1.1自加5 ml乙酸锌溶液起依法操作.
5.1.3含多量淀粉的食品：称取2～5 g样品,置于100 ml容量瓶中,加50 ml水,在45℃水浴中加热1h,并时时振摇（注意：此步骤是使还原糖溶于水中,切忌温度过高,因为淀粉在高温条件下可糊化、水解,影响检测结果.）.冷后加水至刻度,混匀,静置.吸取50ml上清液于另一100 ml容量瓶中,以下按4.1.1自5 ml乙酸锌溶液起依法操作.
5.1.4汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取50 ml样品置于蒸发皿中,在水浴上除去二氧化碳后,移入100ml容量瓶中,并用水洗涤蒸发皿,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀后,备用.（注意：样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度.）
5. 2标定费林氏液溶液：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液,置于150ml锥形瓶中（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀,应将甲液加入乙液,使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶）,加水10ml,加入玻璃珠2粒,从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液,控制在2min内加热至沸,趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液,直至溶液兰色刚好褪去并出现淡黄色为终点,记录消耗的葡萄糖标准溶液总体积,平行操作三份,取其平均值,计算每10ml（甲、乙液各5ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）.（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化,恢复成原来的蓝色,所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态,并且避免滴定时间过长.）
5.3样品溶液预测：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液,置于150 ml锥形瓶中,加水10 ml,加入玻璃珠2粒,控制在2min内加热至沸,趁沸以先快后慢的速度,从滴定管中滴加样品溶液,并保持溶液沸腾状态,待溶液颜色变浅时,以每秒1滴的速度滴定,直至溶液兰色褪去,出现亮黄色为终点.如果样品液颜色较深,滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色（如亮红）,记录消耗样液的总体积.（注意：如果滴定液的颜色变浅后复又变深,说明滴定过量,需重新滴定.）
5.4样品溶液测定：吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液,置于150 ml锥形瓶中,加水10 ml,加入玻璃珠2粒,在2min内加热至沸,快速从滴定管中滴加比预测体积少1ml的样品溶液,然后趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至终点.记录消耗样液的总体积,同法平行操作两至三份,得出平均消耗体积.
6.计算
X3 =（C×v1 × V）?（m× v2 ×1000）×100
式中： X--样品中还原糖的含量(以葡萄糖计),%；
C--葡萄糖标准溶液的浓度,mg/ml；
v1-- 滴定10 ml费林氏溶液（甲、乙液各5 ml）消耗葡萄糖标准溶液的体积,ml；
v2--测定时平均消耗样品溶液的体积,ml；
V--样品定容体积,ml；
m--样品质量,g；
7.注意事项
（1）本方法测定的是一类具有还原性质的糖,包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等,只是结果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示,所以不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖.但如果已知样品中只含有某一种糖,如乳制品中的乳糖,则可以认为还原糖=某糖.
（2）分别用葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖标准品配制标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液,所消耗标准溶液的体积有所不同.证明即便同是还原糖,在物化性质上仍有所差别,所以还原糖的结果只是反映样品整体情况,并不完全等于各还原糖含量之和.如果已知样品只含有某种还原糖,则应以该还原糖做标准品,结果为该还原糖的含量.如果样品中还原糖的成分未知,或为多种还原糖的混合物,则以某种还原糖做标准品,结果以该还原糖计,但不代表该糖的真实含量.