简并引物经PCR的产物是不是都需要经过克隆?
来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/30 02:14:57
简并引物经PCR的产物是不是都需要经过克隆?
我设计的是一对简并引物,测序后有4个位点出现重叠峰,是不是简并引物的PCR产物都会出现此现象?克隆后就能确定这4个重叠峰的碱基吗?
我现在已经做过TA克隆了,应该送去几个菌液测序?测序结果是不是会出现4个大小一致的基因片段?这4个基因片段我都需要用上吗?
我设计的是一对简并引物,测序后有4个位点出现重叠峰,是不是简并引物的PCR产物都会出现此现象?克隆后就能确定这4个重叠峰的碱基吗?
我现在已经做过TA克隆了,应该送去几个菌液测序?测序结果是不是会出现4个大小一致的基因片段?这4个基因片段我都需要用上吗?
如果你用你的PCR产物去测序的话是这样的.因为你拿到的简并引物实际上是几种引物的混合物,因此测序时候会在你兼并引物的地方产生重叠峰.
如果你是挑了单菌落,再提取质粒去测序发现由重叠峰的话,说明你挑的菌有几个不同的质粒的转入.因为如果只有一个质粒转入的话,你在这个单菌落提取的质粒中的序列是唯一的.
克隆以后送两三个去测序就可以了,然后挑测序验证正确的那个序列去做下游操作就行了.
如果你是挑了单菌落,再提取质粒去测序发现由重叠峰的话,说明你挑的菌有几个不同的质粒的转入.因为如果只有一个质粒转入的话,你在这个单菌落提取的质粒中的序列是唯一的.
克隆以后送两三个去测序就可以了,然后挑测序验证正确的那个序列去做下游操作就行了.
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