PCR扩增1829BP的片段,一对引物的Tm都是64度,退火温度已经试过55和50度都没有目的条带,请教pcr设置参数

来源：学生作业帮编辑：神马作文网作业帮分类：生物作业时间：2024/11/12 02:24:32

PCR扩增1829BP的片段,一对引物的Tm都是64度,退火温度已经试过55和50度都没有目的条带,请教pcr设置参数
在55和50度只看到引物二聚体且有拖尾现象,没有目的条带

首先,要确定引物设计成功了啊.
其次,确定试剂都是好的.
再次,确定模板DNA是没有降解太厉害.
还有就是PCR房间温度要控制在室温状态.
像这种夏天要要保持在25--30度室温.
以上都确定了之后,我建议你设计一下touchdown程序（每个循环降0.5度,这个具体程序你去查查,既可以减少非特异扩增,而且不用摸退火温度条件）.
你还可以摸摸温度梯度咯.这个程序就是那个Gradient选项（前提你的PCR仪是可以做温度梯度的PCR）.
如果所有的温度梯度都扩增不出来,我就倾向于是你的引物设计不好了.
一般退火温度越高,越不容易出现非特异,它对引物和模板的匹配要求很高.如果扩增不出来,可以考虑降低退火温度,这样虽然容易出现非特异片段,但是目的片段也相应容易扩增出来.

PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带设计pcr体系质粒扩增扩增片段1.8kb两引物都是87碱基pfu酶怎样设计预变性变性退火延伸的时间和温度我的引物g 我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都 PCR中,PCV2的引物扩增后,跑电泳的条带在多少bp? RT-PCR,自己前后引物Tm差7度,前引物63度,后引物58度,退火温度如何设置? ISSR-PCR引物的退火温度问题在做RT-PCR时,或者是一般的PCR时,退火温度怎么设置,退火温度和Tm值之间有怎么样的关系? 做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因? 我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因. 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度! 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? PCR扩增目标基因,完全没有条带.是不是设计的引物太短?引物只有10个碱基和模板配对