为什么设计出来的引物退火温度过高?

ISSR-PCR引物的退火温度问题 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度! 用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度 请教如何计算出兼并引物的退火温度 退火温度与引物的TM值有什么联系?为什么退火温度要比TM低5度左右最合适? 设计pcr体系质粒扩增扩增片段1.8kb两引物都是87碱基pfu酶怎样设计预变性 变性 退火 延伸的时间和温度我的引物g 为什么PCR所用退火温度要比引物实际Tm低那么几度? pcr引物退火温度55度时不行,58度可以,为什么 PCR摸引物的退火温度,跑胶为什么整个泳道都弥散了,还有marker为什么跑的不好,18孔10ul 询问PCR退火温度设计 PCR过程中引物的碱基数量与种类 和 退火温度有什么关系?