对PCR扩增的产物进行酶切的方法?
来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/24 18:27:40
对PCR扩增的产物进行酶切的方法?
Fermentas公司的研究表明,限制性内切酶在 PCR扩增体系中仍然有部分活性,可以通过稀释(3倍以上)扩增混合液,适当提高酶量和反映时间,进行酶切.我个人认为需要对PCR产物进行酶切分析通常是为了克隆或基因表型分析,由于Taq,Pfu等高温聚合酶在酶切温度(37度或更高)下,仍然保持一定的活性,高温聚合酶所具有的聚合或无模板添A或外切修正的功能仍在一定的程度上表现出来,可能会影响到酶切产物末端的正确性.结果是要么装不上去,要么装上去切不下来,测序发现末端引物碱基少了.正确安全的做法是先通过琼脂糖电泳回收产物,然后酶切,酶切可以适当提高酶的用量.一般的做法是从50ulPCR反应中回收的产物,溶解于45ul水中,加入酶,酶切后的产物通过从溶液中回收DNA的方式直接回收,不需要跑琼脂糖电泳.
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PCR产物的酶切问题PCR产物进行taqI内切酶酶切鉴定 结果出现了几条杂带 分析原因可能为条带内切不完全导致 昨晚酶切
pcr产物不纯化直接酶切连接可以吗?PCR反应的buffer会不会对酶产生影响哦~
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