假设已知一细胞群体中,含有表面抗原cd21+的细胞,如何将cd21+细胞分选出来?
来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/11/12 09:26:37
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可以用抗体标记的方法通过流式细胞仪分选,如果没有流式细胞仪,可以用CD21的磁珠分离.
再问: 谢谢,能提供一下详细点的操作吗,感激不尽!
再答: 好的。 如果是流式分选的话可以用以下步骤: 1.准备单细胞悬液:淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。 2.用冰染色缓冲液洗细胞2次,离心细胞,用冰染色缓冲液重悬细胞,使终浓度为2×107细胞/ml。 3.各取50ul(106细胞)细胞悬液到2个圆底的Ep管中。 4.根据抗体说明书在其中1个Ep管中加入合适的抗体量,另外1个加入同型对照抗体,冰上避光孵育 20分钟(建议每5分钟轻轻混匀,以免细胞沉积)。根据荧光抗体的亲和力适当延长染色时间。 5.用1ml染色缓冲液洗2次去除未结合的抗体,300×g离心5分钟,每次离心后小心吸取上清。 6.用适量染色缓冲液(如500ul)重悬细胞。 7.流式细胞仪分析染色结果(不超过4小时)。如果暂时无法检测,也可以将染色后的细胞用4%多聚甲醛固定后,避光储存在4度。固定后的细胞可以保存最多一个星期。 如果是用磁珠分选,你需要查一下有没有针对CD21的。步骤按照说明书即可。
再问: 谢谢,能提供一下详细点的操作吗,感激不尽!
再答: 好的。 如果是流式分选的话可以用以下步骤: 1.准备单细胞悬液:淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。 2.用冰染色缓冲液洗细胞2次,离心细胞,用冰染色缓冲液重悬细胞,使终浓度为2×107细胞/ml。 3.各取50ul(106细胞)细胞悬液到2个圆底的Ep管中。 4.根据抗体说明书在其中1个Ep管中加入合适的抗体量,另外1个加入同型对照抗体,冰上避光孵育 20分钟(建议每5分钟轻轻混匀,以免细胞沉积)。根据荧光抗体的亲和力适当延长染色时间。 5.用1ml染色缓冲液洗2次去除未结合的抗体,300×g离心5分钟,每次离心后小心吸取上清。 6.用适量染色缓冲液(如500ul)重悬细胞。 7.流式细胞仪分析染色结果(不超过4小时)。如果暂时无法检测,也可以将染色后的细胞用4%多聚甲醛固定后,避光储存在4度。固定后的细胞可以保存最多一个星期。 如果是用磁珠分选,你需要查一下有没有针对CD21的。步骤按照说明书即可。
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