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酶联免疫法(ELISA)测胰岛素的具体步骤.

来源:学生作业帮 编辑:神马作文网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/11/18 23:53:29
酶联免疫法(ELISA)测胰岛素的具体步骤.
酶联免疫法(ELISA)测胰岛素的具体步骤.
1. 包被抗原:用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(5~20μg/ml)各0.3ml加于微反应板每个凹孔        中,4℃过夜或37℃水浴2~3小时,贮存冰箱
2.洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次,每次5分钟
3.加被检标本:每凹孔加入用含有0.05%吐温-20的稀释缓冲液稀释的被检血清各50μl,37℃,作       用1小时
4.配液:将30(48T 的20 倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml 后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干.
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外.
7.温育:操作同3.
8.洗涤:操作同5.
9.显色:每孔先加入显色剂A 50μl(TMB底物),再加入显色剂B 50μl(过氧化氢),轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟
10.终止:每孔加终止液50μl(2M H2SO4),终止反应(此时蓝色立转黄色).
11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值).测定应在加终止
液后15 分钟以内进行.