跑出来的蛋白条带比较少
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/12 16:18:39
我也遇到过这种问题,个人觉得可能是目的基因的定量引物不好,还有就是要优化PCR条件!
存在两种可能性,第一,引物设计错误,可以将引物和参考序列进行拼接后看看能不能顺利拼接,以及拼接之后的目的片段长度;第二,可能是非特异扩增,这个时侯如果确定引物位置没有问题,可以调整退火温度,以及PCR
可能是水污染了,另外还有你操作及操作环境的原因.建议ddH2O灭菌后分装到2ml离心管放入-20°备用,每次用一管如果容易污染的话,建议你到超净台中操作PCR过程
模板是什么?基因组么?两次用的模板是一批做的么?时间长的话模板可能会降解
1、PCR体系中存在污染2、电泳槽中电泳缓冲液不净3、电压不稳定4、如果PCR的模板是经过酒精提取的质粒等相关DNA,则酒精没有除净5、退火时间过长或过短,延伸时间过短等以上是条带与你所要的目的基因的
什么是不清楚?如果有拖带说明你电压太高了.100V跑吧如果是太淡看不清说明你点样的量不够或者PCR扩增出的浓度不高
有没有可能,有环状超螺旋DNA、开环DNA与变性的线型DNA三种空间构想,导致跑出3条带
如果用的Marker有颜色,对颜色.如果是一色的,往往是最小的那个很淡看不清.
深浅表示含量的多少宽度没啥表示吧是你泳道大小决定的
可能有几个原因:一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是
只用sephadex分离效果很差的,特别是分子量差异比较小的时候,基本没有什么分离效果.可以先过离子交换柱:阴离子交换和阳离子交换,这样能除掉很多的蛋白,在过sephadex.
1、内参没有被扩增出来2、电泳时内参没加loadingbuffer或染料
目的蛋白加上标签蛋白的总分子量,当然会有误差.像GST这种标签很大的,有30kd左右.而FLAG,HIS等都比较小.
如果是用扫描仪扫描的图,可以通过软件编辑出深浅比较鲜明的图,但是测量RF不准确.建议使用凝胶成像系统,测量RF比较准确凝胶成像目前国产技术已经比较成熟,上海天能的不错,价格比较实惠
这题是需要判断色素种类,它的意思就是问你‘定性分析某种有机物’可以用什么方法.最常用的是分析那个吸收光谱.因为各种有机物在不同波长的光下有不同的光吸收值,以λ~A作图,可以得到一个化合物的吸收光谱图,
原因有很多,1,PCR出了问题,2,跑胶的缓冲液出了问题3,MARK溶液中的DNA被降解了4,操作时间太长,DNA被降解
博凌科为-为你你用的凝胶染色剂是EB还是Goldview,如果是后者,那Marker一般都跑的不理想.
首先,检查你的agarosegel浓度.一般以0.8%为标准(0.8g琼脂糖+100mlTEbuffer).如果你的目标片段较小(小于100bp),请适当提高凝胶浓度(1.2%-1.5%).其次,如果
很宽极有可能是扩增出两个或多个大小相近的片段,这种片段测序结果往往都是乱封,是多个序列测序结果叠加在一起的.解决办法,更换特异引物,或者胶浓度加大,比如2%的.电泳时间久一些,比如40分钟,就有可能将
可短时间内加热并不能说明加了EB的没有分解或者挥发啊?另外你说的痕量的Ethidiumbromideisanintercalatingagent,whenexposedtoultraviolet