质粒转化所需质粒浓度

质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器（主要指线粒体和叶绿体）中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子.现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌

质粒转化应该比较容易,要检查一下引物对不对.其次是你的模板够不够,因为农杆菌中质粒拷贝数很低.可以提出质粒后再来PCR再问：嗯，载体上没有通用引物，我是用基因特异引物做的。摇菌时我要了24个小时呢，本

质粒

ThisaritclethroughthestepssuchasPCR,transformation,distillingplasmid,EcoRI,connectingmainlinks,purif

不管酶切还是PCR,都是间接的结果.要确定克隆的正确,一定要测序的啊.你测个序,问题就迎刃而解了.到底是什么问题也就清楚了.再问：我前些天去遇到一样的问题，酶切鉴定正确，但测序后什么也不是呢再答：所以

1、“切开的质粒”等于“线性DNA”.2、“线性DNA转化细菌、以及真菌的原生质体”已经成功.所以,切开的质粒能转化进入感受态细菌.但是,不能复制.如果质粒上带有与细菌染色体上同源序列,质粒可以重组交

好像和试剂盒没多大关系把,只能说菌没摇好,重新准备摇大瓶把,当然如果你认为是试剂盒的问题那么可以换好点的,比如axygen,或者其他更好的

一般的酵母质粒转染是用环状形式来进行的,像酵母双杂交之类的.如果用线性化质粒一般都是为了在酵母中表达蛋白,转入的质粒会整合到基因组上的,仍然是线性.

培养之后,根据质粒上的筛选标记,才能知道是否发生了转化.或者是为了让质粒在细菌中大量复制.

质粒是双链环状DNA分子,细菌是原核生物像大肠杆菌里就有质粒.质粒是在细胞质中的DNA.细菌有染色体,只是不具备成型的细胞核,是裸露的DNA大分子

对质粒,双链DNA:1OD(260)=50μg/ml

首先看你是否使用蓝白斑筛选,如果使用了白色菌落就行了,但是x-gal比较贵,所以很多实验室都不用,而用菌落PCR.首先配制clonebuffer,每400微升含EXtaqbuffer40微升,Mgcl

不是不限,而是没法说.问题就在于带有抗性基因的质粒能否在宿主中稳定存在以及有效表达和遗传.这就关系到质粒本身的性质和宿主菌的情况.质粒种类很多,宿主菌的类别更多了,不仅仅和菌的种类有关,同一种菌的不同

问题描述不清.“同时做对照：质粒酶切回收的产物电转”?也就是说拿线性的质粒去电转做对照?如果是这样,你不如用感受态细胞直接做阴性对照,再用原质粒转化做阳性对照,这样更好分析结果.多克隆位点是很小一段,

如果是普通分光光度计,那就需要一个试剂盒,不过我不知道质粒应该用什么样的,可以去生物公司销售人员问一下.具体操作步骤：1、按照试剂盒说明书配出待测液.2、常规分光光度计使用方法,很多人都会.主要步骤包

woke2008(站内联系TA)如果是无抗的LB液体培养基的话,不长就是操作问题或培养基问题（无抗的不小心都会污染的,何况还接了菌）；如果是有抗性的话,那是因为你的平板上的单克隆是杂菌,转到抗性液体培

第一,质粒转化感受态细胞时,只需要一定量的质粒完成转化即可,因此没必要使用高浓度的质粒.第二,质粒是环状的,浓度过高会使得发生断裂,聚集等.第三,浓度过高,溶液比较粘稠,不利于扩散.

“单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒”,首先你的表达有误,单酶切可以切开,说明目的基因有连接上,那么重组载体该是比空载大的.质粒稀释100倍后PCR,有目的条带,也说明了是阳性克隆.有拖带,

质粒是细菌内的一种小型环状DNA,Ti质粒是具体的一种质粒——专指土壤农杆菌内的质粒.

影响转化效率的因素很多,主要有：感受态细胞制备的质量、受体菌生长期（大肠杆菌在对数生长期易产生感受态）、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间（延长冰浴时间可略微提高转化率）