质粒转化后跑菌P跑出两条带

我也遇到过这种问题,个人觉得可能是目的基因的定量引物不好,还有就是要优化PCR条件!

存在两种可能性,第一,引物设计错误,可以将引物和参考序列进行拼接后看看能不能顺利拼接,以及拼接之后的目的片段长度；第二,可能是非特异扩增,这个时侯如果确定引物位置没有问题,可以调整退火温度,以及PCR

可能是水污染了,另外还有你操作及操作环境的原因.建议ddH2O灭菌后分装到2ml离心管放入-20°备用,每次用一管如果容易污染的话,建议你到超净台中操作PCR过程

1、PCR体系中存在污染2、电泳槽中电泳缓冲液不净3、电压不稳定4、如果PCR的模板是经过酒精提取的质粒等相关DNA,则酒精没有除净5、退火时间过长或过短,延伸时间过短等以上是条带与你所要的目的基因的

什么是不清楚?如果有拖带说明你电压太高了.100V跑吧如果是太淡看不清说明你点样的量不够或者PCR扩增出的浓度不高

质粒转化应该比较容易,要检查一下引物对不对.其次是你的模板够不够,因为农杆菌中质粒拷贝数很低.可以提出质粒后再来PCR再问：嗯，载体上没有通用引物，我是用基因特异引物做的。摇菌时我要了24个小时呢，本

有没有可能,有环状超螺旋DNA、开环DNA与变性的线型DNA三种空间构想,导致跑出3条带

如果PCR系统没有问题,很可能是质粒和染色体发生了重组.建议提细菌的genomeDNA做一次PCR.如果是阳性,就说明是这样.另外,还可以另挑几个菌落,重新提质粒扩增.

我觉得用elutionbuffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大

1）质粒上没有这两种酶的酶切位点（或操作失误,试验失败）2）质粒上只有一种酶的酶切位点或两个酶的位点非常接近（

只要制备胶等过程都没问题,marker也跑出条带了,那这种情况最有可能的原因还是质粒的浓度过低.所以,虽然OD值可测出来,但胶显示不出来,我就遇到过这样的情况,还算很普通的现象.下次再加大菌量就行.再

别人给的质粒,第一要做的是转化保种啊,别人给那点哪够分析.转化完了自己抽质粒分析.质粒直接跑电泳理论上是三条带,要想分析建议做单酶切再电泳.再问：又做了一次，拿个质粒菌做阳性对照也都没有提出来。不知道

可能有几个原因：一：上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看（你所用的缓冲液是不是很久了?）二：如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三：不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是

1、内参没有被扩增出来2、电泳时内参没加loadingbuffer或染料

原因有很多,1,PCR出了问题,2,跑胶的缓冲液出了问题3,MARK溶液中的DNA被降解了4,操作时间太长,DNA被降解

非特异性扩增.建议试试：1提高退火温度,或加点DMSO2重新设计引物3做分段PCR,再连起来4全基因组合成

首先,检查你的agarosegel浓度.一般以0.8%为标准（0.8g琼脂糖+100mlTEbuffer）.如果你的目标片段较小（小于100bp）,请适当提高凝胶浓度（1.2%-1.5%）.其次,如果

转膜电流太大了,有可能是转过了,建议你用丽春红染下膜,看看蛋白条带是否清晰.我一般用恒压75V,这样子电流只有一百多毫安,差不多也就是五十多KD的蛋白；背景高的话可以加大脱脂奶粉的浓度,用7.5%的,

首先明确一个问题,你的这个酶切位点在这个质粒中是唯一的吗,也就是说你只想把这个质粒切开吗?看你的结果好象这种可能性大些,那样我觉得最有可能是梅切不完全,即切开的线形质粒会比未切开的质粒跑得慢但两条带很

切开了吧.质粒没切开前是超螺旋,在电泳中比有切口的开环质粒跑得快.