设计引物的片段为500bp,为什么P出来大于500bp的条带

这样就P不出来的啊要换模板的必须要比目的基因要长再问：谢谢。只能重新设计了。

试试把退火时间延长一些,看能不能把两条链连上.一般就是照着引物的Tm值做就可以的.再问：退火时间是30S，应该足够了，对于退火温度能给个建议吗？我现在不加两端引物，先做Pool，看看能不能连，谢谢你的

当然可以咯,不过我没明白为什么上游引物GCrich跟分两段扩增有什么关系,1.2K一次扩增是完全没有问题的,如果上游引物出现GCrich的情况,那么可以考虑在更加上游的地方设计引物啊,在这个基因外测的

一条引物应该与A链一端的序列一致；令一条引物应该与B链在令一端的序列一致.走向应该都是从5’到3‘向基因内部走.

您应该使用巢式PCR来做这个实验.无论您是先提RNA再做反转录,还是直接从DNA中获得基因,考虑到模板的复杂性,都应当使用巢式PCR.建议您先从目的基因的上下游设计一段引物,即外引物,再根据目的基因上

18-25bp产物啊,半定量无所谓吧.这年头为什么还做半定量呢,直接做q-pcr也不贵啊,产物80到500bp,偶喜欢100-300bp的样子.

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段

BestreactionforEcoRIishighslatbuffer,whileHindIIIislowsaltbuffer.ManycompanieswilltellyouHindIIIwoul

150bp我是用你的引物blast,找到相应的匹配结果.尽管菌种不同,但是对于你的引物而言,有两组序列（JN562715.2；JQ010853.1）均显示PCR结果为150bp,所以你的片段长度很可能

cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5‘至3’,所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.

正向测序结果可以找到反向引物的反向互补序列反向测序结果可以找到正向引物的反向互补序列

如果这两个引物特异性很好,扩出来的不是非特异性片段,那么大小应该是一样的,只不过若有等位基因存在的话,会出现个别碱基缺失,也就是会有几b的差异.

跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.

一般使用primer5就挺好,不知道你是扩基因还是启动子,基因是否是已知.PCR引物设计原理:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关

不,需要两条,因为随着你PCR的进行,另一条互补链会被引物扩增出来,因此你需要两条引物都加进去.再问：那么我引物设计的时候，是不是以mRNA为模版与以CDNA为模版设计的引物都可以？再答：都可以，别忘

跟模板配对的一般选超过20个左右的碱基吧,11个短了点.再问：这样是不是肯定不能有效地扩增目的基因再答：如果引物已经合成好了，可以试试运气。。。做个PCR也花不了多少时间如果引物还没送出去合成，那最好

现在一般都是用软件设计引物,也可以用手算.先确定你要扩增的片段起始到终止的长度,引物长度以25个为最佳,最长也可以到40个左右,根据碱基互补配对原则,数出初步设计的引物中的G和C的和,乘以3,T和A的

我觉得不用吧计算Tm和退火不是算的双链部分的嘛不用计算附加碱基,如果要调整PCR的特异性,只是提高退火温度就好了,这个提高不是以附加碱基为基础的.克隆实验倒是无所谓,如果你是要在附加碱基中加入一个小T

应该是对的.因为G或C能互补配对形成3个氢键,所以结合会更加牢固.

“同一对引物可以扩增出不同基因；不同引物也可以扩增出相同基因?”“在基因诊断时,比如镰状细胞贫血是点突变,患者和正常人在突变点两侧的基因是一样的”　　这里混淆了基因和基因序列的概念.患者和正常人的基因