蛋白marker条带出现拖带
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/09/23 23:26:31
可能原因很多:1同源蛋白;2表位相似的杂带;3自身蛋白的修饰,糖基化,磷酸化等;4降解再问:那要怎么确认是什么原因造成的呢一共做了三次都出现这种情况再答:先看看旁边的带是多大。和你的同源蛋白大小类似吗
MARKER有好多种,你看看你用的是哪种,每种都会有个说明书告诉你你的MARKER的每条带指示是多大,然后看你的电泳图中亮条带对应的是MARKER的哪个位置
蓝色条带分别是溴酚蓝和二甲苯青FF(请注意不是二甲苯氰).溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同.希望能够对你有所帮助.
你的电泳缓冲液和制胶缓冲液浓度不准或者脏了吧?换新的电泳缓冲液和制胶缓冲液试试.marker都出问题说明是你的胶的问题,或者电泳操作的问题.
如果用的Marker有颜色,对颜色.如果是一色的,往往是最小的那个很淡看不清.
如果marker跑在胶上的话说明胶是没问题的,要么是你样品蛋白含量太低,可以将样品浓缩一下,也可以加大上样量;或者可能你配的胶的浓度有问题,这样样品可能跑不开,建议根据蛋白的分子量按照分子克隆选用分离
co-ip跑出来的两个蛋白,如果大小不一样,肯定是两条带的,跑WB前会让蛋白质变性,他们之间的结合不存在了跑出来粗是因为co-ip相当于一个纯化的过程,没有co-ip的样是检测一大堆蛋白里面你需要的蛋
erk1/2就表示erk1+erk2分子量分别42,44.也有的抗体只识别其中之一.一般情况下磷酸化不会导致蛋白分子量增加.具体看抗体说明书.CREB容易出两条带原因是CREB和另外一个蛋白同源性太高
不排除是预染Marker质量又问题再问:marker没有问题,实验室其他人做实验就没有问题。因为我是独立出来的,所以实验过程和仪器与他们不是很相同再答:那建议你在适当延长一下转膜的时间吧,三、四个小时
可能有几个原因:一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是
只用sephadex分离效果很差的,特别是分子量差异比较小的时候,基本没有什么分离效果.可以先过离子交换柱:阴离子交换和阳离子交换,这样能除掉很多的蛋白,在过sephadex.
一个可能原因,DNA结合了蛋白质,所以跑不出去.加loadingbuffer后加热(90度以上)一下再上样试试.另外一个原因,你的产物特别大(不一定是目标产物)再问:我做的是菌落PCR电泳检测结果,我
每次用之前煮沸
你好!我也做western有一段时间了很高兴和你探讨下这个问题我觉得该现象很可能的原因是转膜过程中出问题了,即1、转膜后的mark非常歪的原因是胶、膜以及滤纸(三明治组合)之间气泡没赶干净导致的.2、
你是如何知道那条非目的条带也带有组氨酸标签的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂蛋白,也可能目的蛋白部分降解.要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到.可能试试再加一
可能原因:1.取样不够2.操作过程中机械损伤3.缓冲液加量不够4.凝胶未完全融化
博凌科为-为你你用的凝胶染色剂是EB还是Goldview,如果是后者,那Marker一般都跑的不理想.
出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2
首先,检查你的agarosegel浓度.一般以0.8%为标准(0.8g琼脂糖+100mlTEbuffer).如果你的目标片段较小(小于100bp),请适当提高凝胶浓度(1.2%-1.5%).其次,如果
我觉得主要是胶和电泳缓冲液的问题,Tris8.86.8浓度,pH是否正确.SDS的纯度可能也有关系.丙烯酰胺的浓度,交联度合适不合适.做胶的时候各种溶液是否加的正确,胶的浓度是否合适,电泳缓冲液的浓度