荧光定量数据处理时内参的CT值低于目的基因的CT值

直接在NCBI里面查找金银花的内参基因,如果没有的话,就找与金银花同种属植物的内参基因.我做过猪的,在NCBI里查不到猪的内参基因,我就用的小鼠的,因为是持家基因,所以在哺乳动物里面表达的差异不大,也

看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?再问：不知道，我是个新手什么都不懂再答：那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来

相对定量有两种方法.要求扩增效率相同的是ΔΔCt法,因为只有扩增效率相同目的基因与内参基因的Ct值之差才是恒定的值,这是使用这种方法处理数据的前提,所以正式实验之前要进行条件优化,这种方法的优势是不用

这要看你内参照的意思是什么了,如果是防止假阴结果,比如PCR体系受抑制之类的,如果有内参就知道这个结果是被抑制了还是真阴性结果,这时内参探针设计非常简单,就是将目标探针中间几个点突变一下,内参引物和靶

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致.如果加样量是一致的,而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题.理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样.如果你能肯定加样

阈值和基线的设置肯定会影响Ct值,你可以采用每次反应完后软件自己选定的阈值.你也可以手动调整,但是如果你是相同的模板,做不同反应,那你必须使两次实验的阈值和基线调到相同.使用相同的标准品,才能减小不同

内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH,actin.或者18srRNA也可以.如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致.如果出入很大,说

这个很简单啊.你做了一次实验,得到的样本做了一次PCR,得到了一次的相对定量（设对照组为1）.然后重新做实验,再做PCR,又得到一组,这样至少重复3次,就有3组相对定量了.计算标准差对照组的标准差：取

啥都没有的话是无法设计的首先你可以克隆获得内参的序列,再进行下一步实验再问：如果是想用18srRNA这个内参，我该怎么设计引物来得到这段序列呢？再答：这个在各个物种中的同源性很高的，你可以直接用其他物

理论上是越一致越好.如果有很大的差异,说明实验有较大的误差,或者样本有降解.

仪器配套软件会直接给出来一个CT值,也可自己调节

请问你做RealTimePCR做几个循环的?40个吗?40个循环的话,CT值在30左右很正常的啊,CT值30的话大概是10000copies,说明模板含量低嘛,定量定量就是要CT值有大有小的才有比较嘛

没有关系,可以继续按正常步骤计算.内参的CT值通常要控制在25-30,目的基因CT值高,只说明目的基因表达量比较低..没关系..

啥叫不同阶段只要模板不同就要检测内参标准曲线是指拿已知浓度的标准品做出来的曲线不是一个概念

你一次实验做的数据,内参可以得到几个CT值,目的基因也会得到几个.这样的话,根据平均的CT值,就会得到一个倍数（相对量）.实验肯定不会只做一次吧,至少重复3次以上.这样就会得到3个以上的倍数了.3个以

△△Ct=△Ct(试验样品)—△Ct(基准样品)△Ct(试验样品)=Ct（试验样品,目的基因）—Ct（试验样品,内参基因）△Ct(基准样品)=Ct（基准样品,目的基因）—Ct（基准样品,内参基因）2－

不需要完全符合等差数列的.你说说看相关系数R2和扩增效率E的结果怎么样,之后再考虑调整体系和qPCR程序.

不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量（CT值差）过大,用内参基因来衡量目标基因的

看了你空间里的溶解曲线,你可以看到溶解峰的温度都很低,全在80以下,你扩出来的东西多半只是引物,你跑定量的时候有做NTC的孔吗,如果有做,可以对照NTC组和加了模板的组,溶解峰还是一样的话,那你扩出来

2-ΔΔCt法.定量的作用是比较两个或多个样本（前提是细胞数目要相等）基因表达量差异的,基因拷贝数/内参拷贝数只是一个样本的相对定量值.内参的作用只是消除样本间细胞数目的差异.