苯酚法提取植物DNA
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/23 18:41:28
多放一点液氮,磨得时间适当长一些.如果你的样品比较多,在液氮还没有蒸发前迅速把粉末转移到EP官管中,然后把它暂时放到-20的冰箱中,等所有的样品全部磨好后统一加CTAB.你做实验的时候材料最好尽量新鲜
1、苯酚-氯仿是除蛋白的,所以要充分震荡混匀使蛋白变性,但又不能太剧烈而打断DNA;2、离心后要避免再次吸入有机相的苯酚-氯仿,尽量只取上清.
苯酚对蛋白的变性效果更好,所以蛋白除去的效率更高,但是苯酚对DNA有破坏作用,不可作用时间过长.
植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子. 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒. 三、
CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性.在液氮
(1)可以的,液氮冷冻更容易破碎细胞壁释放DNA,但是不冷冻也没关系的,提取的DNA量即使少点也足够满足试验要求.(2)-20度足够保存,用一年以上都没问题,超低温保存时间当然更长,但是切忌反复冻融,
Tris饱和酚:1、冰箱取出重蒸酚,室温放置-68度水浴溶化,切勿立即放入68度的水浴中,以防玻璃炸裂2、加8-羟基喹啉至0.1%和β-巯基乙醇至0.2%,(原液14.4MOL/ML),混匀,溶液呈现
呃……能说下具体的改动部分吗?一般来说,改良法是应用于多年生植物组织的DNA提取,含有较多的酚,多糖,硅质等,棉花和水稻的DNA提取也需要一定的修改.思路有两个,一方面尽量去除杂质、蛋白和脂类,另一方
干燥的叶片和湿润的叶片提取NDA方法是一样的.1.将叶子剪碎,放入研钵中然后加入液氮快速研磨至粉末状,然后用DNA提取液倒入研钵再研磨,再是离心.后面不同实验不同方法了.再问:好的谢谢还有就是研钵没有
可以通过测定它的浓度和OD值,还有办法就是点样和marker比较亮度.因为marker是知道浓度的.
Tris饱和酚分上相(tris)和下相即有机相酚,这样保存可以避免酚的挥发以及防止酚类氧化成醌,抽提时取下层酚相.在吸取的时候要将枪头插到水相以下的酚相.若吸到的是上层tris溶液,它会与我们的上清互
下游做PCR的话,应该保证模板的纯度,CTAB法提取多半会得到浓度不错但纯度不够的DNA,建议将得到的DNA进行纯化,或者直接使用试剂盒提取,现在的国产试剂盒都还不错的,节约时间又不贵
1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5mlEppendorf管中;(2)加入800μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000r/
不加液氮也可以,前题是可以把材料研磨碎.我以前提DNA加液氮是要提二三十管时用的,液氮可以快速研磨材料.
对于植物来说一般用CTAB法,CTAB的优势是对多糖的去除比较彻底,缺点么就是繁琐了点,一般一提要一天
不能直接加CTAB,只有充分研磨成干粉后在加CTAB,如果直接加CTAB,由于植物中水分和糖分多,成粘稠状不易被充分研磨.DNA也不能充分释放,还容易导致DNA断裂降解等.
先将植物细胞用纤维素酶和果胶酶处理,得到没有细胞壁的原生质体,然后把原生质体放入蒸馏水中使其胀破,然后进行离心,分离出叶绿体(比较明显,一层绿色的),然后把分离得到的叶绿体打碎(用搅拌机),把打碎后的
真菌的细胞成分和植物是有差别的,这种专一性的植物DNA提取试剂盒不一定能提好真菌的DNA.如果有条件你最好是买专一性的真菌DNA提取试剂盒.不过植物DNA提取的CTAB法确实可以适用于真菌的DNA提取