紫外吸收法与Folin酚色法相比,有何优缺点
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/12 01:48:52
由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白质溶液在280nm处具有紫外吸收高峰.在一定浓度范围内,蛋白质溶液在此波长处的吸光度与其浓度呈正比关系,因此利用这一性质可进行蛋白质定量测定.该
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由于原子吸收火焰法中生成的基态原子数多,被激发的原子相应地也会多,因此准确度高.
在1.8~2.0间表示核酸较为纯净,没有大的蛋白质污染.ps:其实这种判断方法不是可靠的.分子克隆第三版专门提到过.
不同是绝对的,相同是相对的.
实验原理:采用Folin-酚法测定,Folin-酚试剂由甲试剂和乙试剂组成.甲试剂由碳酸钠,氢氧化钠,硫酸铜及酒石酸钾钠(KNaC4H4O6•4H2O)组成.多肽中的肽键在碱性条件下,与酒
测定方法上有算法的吧.吸光度的下降速率表示酶的活性,下降速率越快表明酶活性越大.当然是其它条件相同的情况下.有哪不清楚给我留言!
你在利用UV测定之前,首先要做一个“OD280对蛋白质浓度”的一个标准曲线(工作曲线),这样从理论上,你可以通过OD值来换算出所测样品的蛋白质浓度,即所谓的真实值.但是任何方法都有缺陷,此处所用的标准
避光没做好、试剂失效
大概与样品中的干扰物质有关.干扰Folin酚法的物质有:酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等.干扰考马斯法的:主要是去污剂,如TritonX-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0
其基本原理应该很清楚了,所以在此就不作说明.需要注意的是,用此方法测蛋白质时,还原反应发生在PH10的溶液中,而Folin试剂在碱性条件下不稳定,所以将Folin试剂加入碱性的铜和蛋白质溶液中必须立即
不能,FOLIN酚法测定是可溶蛋白质,鱼粉蛋白质不溶于水,难以用这种方法测定.可以用凯式定氮法测定.先硝化后测定.
Folin酚法最好,准确度最高;双缩脲法最差,准确度最低;现很少用;考马斯亮蓝G250法介于两者之间.
紫外吸收法是以含有苯环的氨基酸为基础测量的,OD280值,各种蛋白含有的苯环的氨基酸数量不一定,所以只是大致估计.LowryProteinAssayKit福林酚蛋白浓度测定试剂盒\x05产品说明:在碱
--不做标准曲线你怎么通过吸光度来计算浓度?因为两者反应更灵敏,至于为什么反应更灵敏,问化学牛人.
[编辑本段]1原理蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以
优点:是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多;重复性好.颜色深,析光度.缺点:是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多.近年来folin-酚法逐渐被考马斯亮兰
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量是双缩脲法原理,所用的试剂是由两部分组成的.第一部分相当于双缩脲试剂,第二部分为Folin-酚试剂(磷钨酸和磷钼酸混合液).因此,反应的程序也是分两步进行的.第一步相
最主要的考虑的是多糖类物质和蛋白的干扰
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(-C=C一C=C一),能够强烈吸收250~280nm波长的紫外光.核酸(DNA,RNA)的最大紫外吸收值在260nm处.遵照Lamb