把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶?引物如何设计?

这叫克隆,看一下分子克隆的书吧

1）利用DNA连接酶便可以将目的基因（已经剪切下来的）连接到质粒载体上2）目的基因的获得：利用限制性内切酶（限制酶）.这种酶具有专一性...可以识别特定的回文序列来进行剪切.3）如果你想得到一种基因,

具有相同的粘性末端的两条DNA链在连接酶的作用下相连.只有一种酶切时,切出的粘性末端相同,让目的基因和质粒相连接即可,但是由于是混合,连接的结果不尽相同.DNA连接酶将目的基因和质粒粘性末端的3-5磷

确实可以不一定要TA克隆.你可以在设计引物的时候在引物的5'端加上酶切位点,比如你选中XXXYYY位点你可以把引物设计为AA－XXXYYY－AGCT(AGCT代表你原来的引物序列）.我一般在头上加2个

正如你所言,如果没有插入目的基因,只是载体导入同样能抗青霉素.问题的关键在于我们做实验时是吧质粒和目的基因动用限制酶剪切了,再用连接酶连接,其结果是有载体自连接的（只有载体）有重组的；有目的基因自连的

分子水平上,用人工的方法提取（或者合成）不同的生物的遗传物质,在体外切割拼接和重新组合,然后通过不同方法把重组的DNA分子引入受体细胞,使外源DNA在受体细胞进行复制与表达,按人的需要生产不同的产物或

双酶切,然后做ligase连接就好.连接的过程中会出现很多突变.然后你把连接的产物做转化.如果有条件可以使用电激转化,这个转化的效率非常点（连接产物本来就不多,突变又多）.如果条件不够就用热激转化,热

你的质粒提出来以后没有经过线性化,因此存在三种形态,超螺旋,单链开环和线性分子,其中只有线性分子可以用maker判断分子量大小,另外两种不行,如果你的质粒提的质量好的话,应该是超螺旋占优势,超螺旋会比

用一种限制性内切酶切割质粒和目的基因,加入DNA连接酶,形成重组DNA分子

重组时选择你的目的基因上没有,而质粒的多克隆位点上有的酶切位点,一般重组质粒需要两个酶,所以你要选择两个酶切位点,注意尽量避免使用切出平末端的酶.重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在

如果是双酶切,而且两个酶切位点不能形成自连,那么插入目的基因也只能获得一种重组质粒.如果是单酶切,或者双酶切的两个酶切位点是同尾酶,那么插入目的基因能获得两种重组质粒.

构建之后,这三种情况都是存在的,然后先把这所有的全部导入细胞（当然不是同一个细胞）,在质粒上会有某种抗性基因,就加入这种抗性基因（比如它抗某种抗生素,就加入这种抗生素,含目的基因—目的基因的这种重组片

且不说细菌没有染色体染色体变异指的是大规模的遗传物质损伤比如染色体缺失,染色体畸变等等.和质粒重组完全是两个概念~~~染色体变异都要引起染色体形态甚至是遗传型的改变~~~~

染色体变异不一定牵涉到基因

southern是检测你的目的基因是否转入受体即你的转基因植物中,在插入了目的基因的表达载体中应该可以检出你的目的基因,但这并不意味着你的目的基因就一定会成功的转入植物中.不知你转的是什么植物,如果你

方法非常多,列举一两个：1.不同的粘性末端不能相连.所以,如果要相连,就要去除不同的粘性末端,进行平末端相连.粘末端变成平末端有两种方法：klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平.为了减少载体自连,可

选B.基因工程中选取的载体的三条件之一是有标记基因,便于鉴定筛选插入了目的基因的受体细胞再问：但他问的是目的基因表达啊

启动子有自己的碱基序列会进行识别再问：大侠，如果我插入两个目的基因片段，如何控制他们两个的表达量呢再答：放在特定的培养基中基因的表达是先复制进行转录和翻译所以是由基因本身控制的

不一定.一般来讲,只要这个基因对重组质粒发挥功能是必需的,那么它应该有一个启动子和一个终止子.也有这种情况,比如说,目的基因与标记基因共用一个启动子和一个终止子,但是目的基因和标记基因是融合的.总之来

什么基因?什么质粒?正常情况不用这样做的一般做表达用的基因片段是需要测序鉴定的连T载体就是为了去测序,证实你扩增片段没有突变且是你需要的目的片段然后再去连接你的目的载体就ok了