感受态细胞菌种多少度保存

若感受态细胞要保存备用,液氮保存最好,其次一70℃,添加20％甘油利于冷冻保存,但添加保护剂对转化率有抑制作用.

1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟.2、弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g

一般保存是在-80摄氏度,-20度可以放一段时间,但不能太长.底部有沉淀正常,甘油只是悬浮菌体,而不能溶解,久了就会沉淀下来!转化质粒失败是其他原因,最大可能性是感受态无活性,建议重做感受态,及做即用

冰浴过程中,原来加在溶液中的钙离子和细菌细胞膜结合,在低温下形成液晶结构,这样,在42度热激下,这种液晶结构收缩,将细胞膜扯开孔道,使DNA进入细菌细胞中.这就是原理.前面冰浴不清楚,热激我认为是让已

1、液体石蜡覆盖法：他是指斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,不但可以阻止氧气进入,同时又可以避免菌种死亡.2、就是在动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法.3、

感受态的细胞处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态.再者,将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不仅可以检验重组载体是否构建成功,最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验,如蛋白质表达纯

甘油就可以了,DMSO是用来保护细胞这种比较娇嫩的,大肠杆菌就用便宜一点的好了.有问题一起讨论解决哦~

可以重新进行分离、纯化和复壮.1、先将菌种活化,如用适宜的液体培养基培养.培养条件是所保藏菌的适宜温度等条件；2、之后在平板上进行单菌落培养和分离；3、挑取典型菌落,进行革兰氏染色,显微镜下观察其颜色

这属于专业问题啦下面的简单方案是Clhen等(1972)所用方法的变通方案,常用于成批制备感受态细菌,这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107个转化菌落,这样的转化效率足以满足所有在

完全可以,我们以前就是放液氮里的～

1.将冻存的菌种1：100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养.2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h.3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4

要看你做的是什么了.大肠杆菌感受态根据用处的不同,也有很多种类,比如比较常见的TOP10、DH5α,质粒保存较为稳定的JM109、STBL3,表达所用的BL21等等.除此之外,植物基因转化常用土壤农杆

各种酱类调味品最好放进冰箱保存.　　要说什么东西需要放在冰箱里,首先要从冰箱的作用说起.　　冰箱能够让食品的保存时间延长,归根到底就是一个“冷”字.按照化学的基本原则,如果温度降低,化学反应的速度就会

冰浴是为了质粒附着在菌体表面,热击是打开通道让质粒进入,觉得LZ的做法影响不大,不过要实际验证

甘油保存菌种的条件是需要冻存.主要靠低温来降低微生物活性,达到保存的目的.加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞.

感受态细胞你先用稳定浓度的高纯质粒测一下效率,如果达不到10的5次方就别用了.如果效率挺高有6或7次方而转化子不多,那么就和你构建的质粒有关了.制备感受态,一个要快,二要一直保持细胞在冷冻状态,所有e

影响感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项：1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株OD600为0.

第一,质粒转化感受态细胞时,只需要一定量的质粒完成转化即可,因此没必要使用高浓度的质粒.第二,质粒是环状的,浓度过高会使得发生断裂,聚集等.第三,浓度过高,溶液比较粘稠,不利于扩散.

对照组被污染了,或者氨苄有问题,或者在配制培养基的时候在培养基还没冷却的时候就加了氨苄.其实大肠杆菌感受态可以买的,又不贵.自己做太麻烦了.我已经说了啊,可能是对照的大肠杆菌被污染了,或者这些大肠杆菌

感受态不是最适的OD为0.5-0.8么?（转接后培养的）我是按照1:100转接培养,OD值除了和培养时间有关,转速也有影响.一般过夜的话,10个小时左右,转速100如果要早晨转接,下午做,一般5、6个