引物不同扩增的条带一样大吗
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/18 14:20:23
正反向引物就是一个引物是从3端开始,另一个是从5端开始的.看分子生物学的书吧,里面有详细介绍DNA复制的啊,就是那些理论而已.解释的太简单了,我做过pcr扩增的实验,不懂得可以问我,我尽量回答.
如果实验目的只是基因型鉴定,对PCR产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件:1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列;2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有
上下引物的Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度;内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.没有目的基因是因为1该基因确实不表达;2你的引物不特意,到NCBI的Prime
把两个目的基因引物浓度和内参引物调成一致的,因为在计算结果时是要和内参基因对比的.
这个很正常,引物本身的结构和模板的结合牢固程度,就会影响扩增的效率,导致扩增出来的片段亮度不同.
可以用,没有任何特别问题.实际上,如果你用过一些引物设计的软件,有时候你会发现,软件设计出来的引物长度有可能不同(当然,大部分时候是相同的),这有可能是考虑的引物Tm,引物二聚体,引物非特异性结合等问
基本不是.当今发展出各色各样的PCR扩增技术,各色各样的高温聚合酶,就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出、扩增效率低的问题.如巢式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片段.有些重复片段的扩增,GC含量高的
解题思路:PCR技术解题过程:varSWOC={};SWOC.tip=false;try{SWOCX2.OpenFile("http://dayi.prcedu.com/include/readq.p
如果这两个引物特异性很好,扩出来的不是非特异性片段,那么大小应该是一样的,只不过若有等位基因存在的话,会出现个别碱基缺失,也就是会有几b的差异.
为什么只有10个碱基配对呢?引物总长多少?再问:加上3bp保护碱基和9bp酶切位点。总长19bp再答:晕死,这么短,一般引物都是18-20bp,再加上保护碱基和酶切位点好吧再问:好吧。谢谢你啊!又合成
我也遇到过类似的问题,根据同源性设的引物来PCR,结果出来的是非特异条带,要不就是没有.还是得优化条件比如引物和模板的比例
原因很多,你是否提到了DNA,可以将你跑的DNA直接跑胶看看,到底有没有条带;PCR扩增的程序有没有问题,或者引物是否有问题,可以找个对照DNA试试,相同扩增条件下,是否扩出条带,如果扩不出来就用可能
用dl2000marker的话,在750bp(从上往下第三条带)和1000bp(第四条带)之间,
PCR产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子.也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带.如果只是进行PCR产物回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了.问题
这要具体分析.一种可能是你的PCR产物是非特异性片段,所以长度不一,这可以通过和你预期PCR产物的长度进行比较来判断.另一种可能是该基因在不同情况下有不同的剪接模式(alternativesplici
一般来说,引物都是成对设计的,包括上游引物和下游引物;除非你设计出来的上游引物与下游引物相同,才可用单引物扩增.否则,若用单引物则只能扩出一条链再问:用单引物扩增出的产物跑电泳,在紫外灯照射下的条带是
这个问题很简单,扩增序列应该称为目的基因,目的基因一般都上万bp,从两头开始当然不合适.PCR扩增只能扩增出上下游引物之间的序列,因为只有引物之间的DNA双链是解链状态的.你的问题说明你对基础知识掌握
如果引物序列,PCR体系,程序,以及所用的物种都和文献一样的话,可考虑两种情况:1.你所参考的文献真实度有待考量.2.你所提取的该物种DNA质量不好.需重新提纯.
“同一对引物可以扩增出不同基因;不同引物也可以扩增出相同基因?”“在基因诊断时,比如镰状细胞贫血是点突变,患者和正常人在突变点两侧的基因是一样的” 这里混淆了基因和基因序列的概念.患者和正常人的基因
1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题