如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,你打算如何设计引物?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/10 21:34:07
根本上说是已知核苷酸序列.如果序列知道了,它在什么基因上也就知道了(可以通过BLAST搜索的).PCR的过程是这样的,你首先需要化学合成两条短的单链DNA序列,叫引物(可以直接叫一些公司帮你合成),这
正向引物:5'CTTCGAAATTC反向引物:5'CCGATCGGGAGA(TCTCCCGATCGG的反向互补序列)当然,这对引物有些短,其实真正设计时上下游引物的序列中都可包含部分基因1的序列,以平
不对,任何体细胞都有性染色体,因为它们都是从同一受精卵增殖分化而来的.PCR需要目的基因做模板才可大量复制.
FPrimer:5'-TTGTAAAAAAATTAAATTAA-3'RPrimer:5'-CATATTTTAATTAATATTTC-3'你这个序列AT含量太高,尤其是5'端A有7个连续重复,引物本身很
基因文库指将某些DNA导入大肠杆菌等细菌中,通过细菌的增值达到保存基因的目的.所以数量应该已经很大了,因此不需要再经过PCR扩增.
把这段基因输入设计软件里,调节引物位置,使变性温度在94度,退火温度=Tm-(5到10度)延伸温度72度左右,满足这些条件基本就可以了,当然还要根据实际情况多次实验得到最佳引物.如果你要扩增整个的基因
前提:你的这条序列是5‘--3’的吧正向引物5‘--3’:TGCAACTACGTCCAC反向引物5‘--3’:TCGGACAAGACGTGC再问:能说说为什么吗?再答:DNA是双链的,引物结合于一条链
因为DNA聚合酶需要结合在双链区域,才能启动后续的脱氧核糖核苷酸的聚合作用.因此需要引物(PCR中是DNA,而生物体内是RNA)来构成双链区,从而使DNA聚合酶识别并结合,启动聚合作用.
中间有一段未知没有关系啊,从两头已知的里面设计引物,然后进行PCR,克隆到载体上,或者PCR产物直接送去测序,测序结果blast即可
我个人感觉对PCR影响最大的是模板质量和退火温度,至于其他的影响因素那就太多了,模板纯度浓度,引物质量,体系中的物质(buffer,酶,Mg2+,dntp浓度),退火和延伸温度.一般来讲,引物从ref
以PCR产物为模板,只要引物,体系对,怎么P怎么出.你的模板就是PCR产物,浓度再低也没事,稀释100倍没问题.没什么要注意的
解题思路:PCR技术解题过程:varSWOC={};SWOC.tip=false;try{SWOCX2.OpenFile("http://dayi.prcedu.com/include/readq.p
能说下原题么、
非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一
PCR非特异性扩增指的是你进行PCR所扩增出来的条带不是所要的,引物与模板在非目的条带处有错配,导致延伸产物不是目的条带.非特异性扩增在琼脂糖电泳时可以看到在目的条带外出现了其他条带.引起非特异性扩增
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造
HIV是逆转录病毒,但是逆转录病毒并不一定将自身DNA插入宿主DNA.(PS:能这么做的病毒一般都致癌)HIV只是利用T4细胞的细胞器进行自我复制而已.要检查只能查核酸.(PS2:其实能查到RNA的互
可分为长产物片段和短产物片段两部分.短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间,是需要扩增的特定片段.短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的,以一个原始模板为例,在第一个反应
1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题