双向电泳分离出一个新蛋白,如何探讨它的功能?

我以前提的蛋白用的是TCA-丙酮法,可是跑了好几次,电压都升不上去,谷友们说可能是盐离子浓度过高,但是我用超滤的方法试了,电压还是升不上去,我只有重提蛋白,（我还是想用TCA-丙酮法）但我不知大家在用

图谱不齐条带扭曲什么的可能是纤维膜质量不好,缓冲液有问题,电泳电压电流不稳定；拖尾或过密可能是电泳时间不足；要不就是点样没点好,点样时薄膜上还有水；透明后膜不透彻可能是染色时间太长了吧,我觉得不到10

电泳法分离是分子量小的脂蛋白跑在前面,分子量大的在后面,超速离心分离时是密度越大的沉在底部,密度小的在上部.对于大多数血浆脂蛋白而言,在这两种实验的图谱上的排列是刚好相反的.糖尿病人发生酮中毒是由于脂

aa测序→到数据库上BLAST→预测结构功能,蛋白的性质,胞外还是胞内还是膜蛋白,相似序列相似蛋白,预测蛋白间相互作用,总之先通过数据库做大量的预测工作,好几周甚至上月,然后钓出基因做功能实验、双杂交

差异表达的蛋白,在基因水平上不一定有差异,还有可能是“负责调控他们表达的蛋白”的差异造成了你所说的蛋白的表达差异.话说的有点绕,不知道你明白吗.我加了引号,引号中的蛋白不是你所说的蛋白

蛋白质不带电,氨基酸带电.在电场作用下,氨基酸运动,他们就会分离开来.

蛋白质2维电泳1个方向是SDS-聚丙烯酰胺凝胶主要是把蛋白质按照分子量分开1个方向是等点聚焦把蛋白质按照等电点的不同分开这样就可以把不同的蛋白质尽可能的分开可以结合质谱对细胞进行蛋白质组的研究例如我们

不知道分子量的情况下就尽可能选择浓度高的分离胶,因为浓度低的胶很有可能蛋白就跑出去了.先用高浓度的胶跑一次,然后看条带再调整下分离胶浓度再做一次就行了.另外,一般快速测定蛋白浓度的方法就是用分光光度计

C的PH值与该蛋白等电点时PH值最接近,此时蛋白所带电荷几乎为零（等电点的定义---蛋白质或两性电解质(如氨基酸)所带净电荷为零时溶液的pH）.蛋白在等电点时由于不带电荷,溶解度最小,容易发生分子间的

缓冲液PH8.6,根据血清蛋白等电点可知,蛋白质带负电,所以纤维膜蛋白质端应放于阴极端,负负相排斥,使得蛋白质运动!

一、原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法.带电颗粒在电场力作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳.由于各种蛋白质都有特定的等电点,如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液

我简要回答,你还得自己发挥.原理,根据蛋白质都具有特定的等电点及分子量这2个属性,首先在IEF胶条上进行等点聚焦,具不同等电点的蛋白会电泳到和其等电点一致的位置；第二IEF进行SDS-PAGE,胶条上

你先提取这个菌株的总DNA或总RNA.然后根据这个酶的同源酶或同家族酶的基因信息（NCBI上面去找）设计几对特异性或兼并引物,然后PCR扩增出来就行.如果没有相关信息或者信息很少,你可以先纯化这个酶,

你是要做活性胶吧.这种胶又叫naturalgel.顾名思义就是蛋白质在其中电泳的时候是保持不变性的.所以不能有SDS.下面是一篇参考文献,如何做SOD活性胶：

蛋白质2维电泳1个方向是SDS-聚丙烯酰胺凝胶主要是把蛋白质按照分子量分开1个方向是等点聚焦把蛋白质按照等电点的不同分开这样就可以把不同的蛋白质尽可能的分开可以结合质谱对细胞进行蛋白质组的研究例如我们

1将准备好的薄膜划线面朝下,与巴比妥——巴比妥钠缓冲液中充分浸透（约30min）2,电泳开始的10min内电流调为0.3mA/CM膜宽,10min后调至0.6mA/cm膜宽.电泳60min,待电泳区带

①包涵体加入SDS-PAGE上样品缓冲液后,和缓冲液里的SDS及DTT一起加热会溶解.②如果是为了检测表达产物是可溶还是包涵体,在细胞破碎后离心,将上清及沉淀分别进行电泳,如果目的条带在上清中,则为可

SDS-PAGE即变性聚丙烯酰胺电泳是按照蛋白分子的大小分离蛋白复合物的2D是通过一向等电聚焦后按照蛋白等电点分离蛋白复合物的

先是用PEG胶电泳分离不同分子量的蛋白条带,然后转移到膜上的,才能看的呀,可以用丽春红染色液染色后看,当然还可以用考马斯亮蓝进行胶体染色看血清蛋白是否全部转移到膜上.

蛋白质等电点