以mRNA模板 设计引物 多聚A尾巴 反转

如果是用在原核上,没有多大的却别,但是如果用在真核上,cDNA扩增出来的产物就比DNA直接扩增出来的短.因为cDNA是RNA逆转录过来的,而DNA里面除了RNA上面相对的片段还有内含子的片段,在扩增的

一般未知的序列旁边都有已知的一段吧,就是你说的“修饰片段”?PCR这种flankingsequence可以有很多方法,比如TAIL-PCR,用ADprimer（简并引物）和特异性引物就可以得到目标片段

呃,难道你不会设计引物?获取基因不需要用内参.内参是做表达分析时才用的.比如你做RT-PCR考察不同组织中HintI表达差异时才需要用内参的.

用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说

mRNA序列从NCBI上搜如果是常规PCR引物用pp5设计realtime引物搜别人文献里面报道的实在没有再自己设计

全部打断,加接头,然后引物设计在接头上.

一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.

cDNA再问：真核基因转染其他细胞时一般选择表达DNA还是mRNA?再答：转进去的是DNA。整合到受体基因，表达mRNA再问：那你研究某一基因时，若需克隆你是不是一般以DNA序列设计引物啊？若是以mR

cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5‘至3’,所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.

翻译的起始部位总是在mRNA的5’端,终止密码总是在mRNA的3’端,因此翻译有方向性,蛋白质合成总是从N末端开始,到C末端止.在哺乳动物中,N末端的第一个氨基酸为甲硫氨酸,但有时在多肽链释放后,甲硫

DNA的每一条链上都有遗传信息都会合成相应的mRNA,再合成蛋白质但是按照你说的,说明DNA模板链具有遗传信息

一般来说,RT-PCR的时候很多情况下会不知道模板DNA的序列,可以在Genbank中寻找和你要扩增的物种的亲缘关系较近的物种的同源基因,多找几种,用DNAMAN或其他软件可以比对它们的序列,这样可以

A、复制的模板是DNA，转录的模板是DNA的一条链，A错误；B、转录的模板是DNA的一条链，B错误；C、翻译的模板是mRNA，但复制的模板是DNA，C错误；D、翻译和逆转录的模板都是mRNA，D正确．

与3’端结合,因为新链的生成（不管是DNA复制、转录还是反转录）都是由5‘端向3’端进行的,只有引物与模板的3‘端结合,才能保证新链由5’端向3‘端生成.

为什么只有10个碱基配对呢?引物总长多少?再问：加上3bp保护碱基和9bp酶切位点。总长19bp再答：晕死，这么短，一般引物都是18-20bp，再加上保护碱基和酶切位点好吧再问：好吧。谢谢你啊！又合成

16个退火温度太低了吧18-20不错再问：我需要使退火温度低点。16个会导致非特异性扩增吗再答：会不会有非特异性扩增得去blast一下才知道不过肯定是越短概率越大就是

可以在引物上添加不配对的碱基,但是在引物的3‘端,至少有三个碱基是严格配对的.但是这样的操作主要是为了添加酶切位点或者flag等.Tm值是根据两条链的退火情况来计算,不配对的碱基不算在内,所以你添加不

如果设计在内含子序列中,RT-PCR检测到的可能是未被剪切的preRNA或RNA中污染的核DNA,如果设计在外显子序列中,RT-PCR检测到的可能是成熟mRNA,未被剪切的preRNA或RNA中污染的

不用太纠结,有点儿具体也是可以的,一般都能P出来.再问：很多mRNA选择设计不同长度的引物，没有一对是无found显示的，真的很让人纠结；请问文献上的引物有的也是这样吗，不完美，但能扩出来，不会影响q

引物设计与编码链与模板链都没有关系,根据你讲的后期表达,说明需要表达出这种蛋白,那么你的PCR应该是以这段基因的mRNA为模板来设计引物,这样才是外显子所需要表达翻译的蛋白.生物都是基因转录mRNA为